甲基苯丙胺免疫层析试纸条的研制

• 作 者: 江静
• 发表日期: 2003年01期
• 关键词: 甲基苯丙胺 胶体金 免疫层析 单克隆抗体

采用竞争法，即尿液中甲基苯丙胺的代谢物和硝酸纤维膜(Nitrocell μ lose，NC)上的甲基苯丙胺-BSA(bovine serum albumin，牛血清白蛋白)结合物竞争胶体金标记的甲基苯丙胺单克隆抗体这一基本原理，利用免疫层析技术制作成试纸条，快速检测人体尿液中是否含有甲基苯丙胺毒品，从而判断是否滥用毒品。 当试纸条插入尿液后，如果尿液中无甲基苯丙胺类毒品，胶体金标记的抗甲基苯丙胺单克隆抗体与涂于NC膜上的甲基苯丙胺-BSA结合物反应，在检测区出现一条红色线，结果为阴性；反之，当尿液中含有甲基苯丙胺类毒品时，这些毒品或其代谢物在检测区域和NC膜上的甲基苯丙胺-BSA结合物竞争胶体金标记的甲基苯丙胺单克隆抗体。当甲基苯丙胺类毒品达到一定量时，胶体金标记的抗甲基苯丙胺单克隆抗体全大部分与其反应，而不足以与涂在NC膜上(检测区)的甲基苯丙胺-BSA结合物结合反应，检测区不出现红色线条，结果为阳性。不管尿液中有无甲基苯丙胺类毒品，胶体金标记的抗甲基苯丙胺单克隆抗体都会与涂在NC膜上的羊抗鼠二抗发生免疫反应，在控制区出现一条红色线。因此，阴性反应为两条红色线，阳性反应为一条红色线。 采用枸橼酸三钠还原法，将氯金酸烧制为粒径在27nm左右的胶体金。标记条件为pH在6.5～7.5之间，甲基苯丙胺单克隆抗体浓度为20μg／ml。采用Millipore公司的玻璃纤维纸和型号为SHF1350425的硝酸纤维素膜作为层析材料制作试纸条，其中抗原、二抗的浓度分别为0.2mg／ml，玻璃纤维纸上的标记物喷涂量为30μl／cm~2。 制作成的试纸条，其方法灵敏度为1000ng／ml，甲基苯丙胺特异性为100％，与27种常用的麻醉品、滥用药物以及33种常用的市售药品无交叉反应，5分钟内即可出结果，而且结果显示清楚，具有快速、简洁、省时、实用等特点。