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背景：神经胶质瘤是颅内肿瘤中最常见的一种恶性肿瘤,它的恶性程度高、预后不佳,因此严重威胁着人类的健康。神经胶质瘤的传统治疗包括：手术切除肿瘤、放射治疗和化学治疗,然而历经了一个多世纪的治疗进程后,至今仍没有突破性的进展。近年来新发展的免疫治疗、基因治疗等生物治疗技术,主要作用于于肿瘤发生的信号通路,然而这些新技术在临床或者动物实验中并没有明显改善生存率。冬凌草甲素(Oridonin)是由中草药冬凌草中提纯的一种化学物质,它被认为在人类肿瘤的发生中能够发挥广泛的抗肿瘤效应。目前关于Oridonin对于肺癌、肝细胞癌、胰腺癌、膀胱癌、骨肉瘤等方面均已进行了系列研究,而Oridonin对于神经胶质瘤的作用尚未有深入研究。目的：1、通过体外细胞培养和细胞增殖能力检测,评价Oridonin对于神经胶质瘤细胞增殖的影响；2通过流式细胞周期检测,明确Oridonin对于神经胶质瘤细胞增殖周期的影响；3、通过检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白表达情况,探索Oridonin通过诱导胶质瘤细胞凋亡抑制肿瘤生长的机制；4、通过荷瘤小鼠模型体内实验,阐明Oridonin在体内对于神经胶质瘤生长的影响以及组织内细胞凋亡和增殖的影响。方法：采用体外培养U87、U251细胞,分为对照组和不同浓度Oridonin处理组,并给予相应处理。通过MTT法和平板克隆形成实验检测各组细胞的增值能力和细胞克隆形成数量；通过Annexin V-FITC/PI双染和流式细胞计数检测U87和U251细胞存活、早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例；通过Hoechst 33342染色检测U87和U251细胞凋亡的形态学改变；通过PI染色和流式细胞计数检测U87和U251细胞的细胞周期改变；通过提取细胞总蛋白和线粒体、胞质内蛋白,BCA蛋白定量后利用Western Blot分析检测U87和U251细胞凋亡相关蛋白表达情况；过腹膜内注射U87细胞建立裸鼠荷瘤模型,Oridonin饲养第28天后处死小鼠取出肿瘤组织,检测小鼠体内肿瘤重量和体积的变化；通过对分离出肿瘤组织进行免疫组织化学染色,检测体内肿瘤组织内caspase-3和PCNA的表达情况。结果：MTT实验检测发现U87和U251细胞系都表现出对Oridonin勺敏感性,随着Oridonin用量的增加和药物培养时间的延长,细胞的存活率也逐步受到抑制。平板克隆实验结果发现：Oridonin处理组相对于对照组U87、U251细胞克隆均明显受到抑制。流式细胞仪检测细胞周期实验中,与对照组相比,经过Oridonin处理后U87、U251细胞分裂处于S期的细胞比例明显增加,相应的处于G2/M期的细胞比例下降；处于G1期的细胞比例明显下降。细胞周期相关蛋白VVestern B lot实验中,与对照组相比,经过各组浓度Oridonin处理的U87和U251细胞细胞中的CyclinA的表达量明显下降；Cyclin D1和Cyclin B1的表达量均有明显下降。Hoechst33342染色发现,经过Oridomin处理24h后,U87和U251细胞均可见核溶解后出现的碎裂核及浓缩核,并且随着Oridonin浓度的增加,相对于对照组碎裂核及浓缩核逐渐数量明显增加。流式细胞仪细胞凋亡检测实验发现Oridomin处理48h后U87和U251细胞的存活率均随着Oridonin用量的增加而显著降低,同时凋亡细胞的比例显著增加。在U87细胞实验中,随着Oridonin量的增加,处于早期凋亡和晚期凋亡阶段细胞的比例显著增加。在U251细胞实验中,10μpM/L Oridonin组早期凋亡比例显著高于对照组,2.5μmol/L和5μmol/L Oridonin组与对照组比较,早期凋亡细胞比例无明显差异；5μmol/L 和10μmol/L Oridonin组细胞的晚期凋亡比例显著高于对照组,2.5μmol/L Oridonin组与对照组比较,晚期凋亡细胞比例无明显差异。Western Blot检测凋亡相关蛋白表达发现,Oridomin处理后U87和U251细胞的抗凋亡因子Bcl-2、促存活因子NF-κB的表达均明显降低；反之,促凋亡因子cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9和PARP-1的表达量明显升高。经过Oridonin处理后的U87、U251细胞胞质内的Bax表达水平降低,线粒体内的Bax表达量升高,胞质内的细胞色素C的表达量升高。裸鼠荷瘤实验发现Oridonin腹腔注射处理组的肿瘤组织重量明显小于对照组；Oridonin处理第13天出现肿瘤体积明显减小,饲养第27天, Oridonin处理组的肿瘤组织平均体积为明显小于对照组。免疫组化染色发现Oridonin处理组的cleabed-caspase-3表达量明显高于对照组,PCNA表达量明显低于对照组。结论：Oridonin印制胶质瘤细胞的增殖呈时间-剂量增强效应,通过将细胞周期阻滞于S期,并且可能通过启动并激活线粒体凋亡通路诱导胶质瘤细胞凋亡,从而抑制神经胶质瘤细胞生长,进一步发挥抗肿瘤效应。Oridoni对于神经胶质瘤生长的抑制作用使其可能成为治疗胶质瘤治疗的一项新策略和备选新药。