E.coli内表达渗调蛋白的功能检测及其马铃薯体内转化研究

来源 :宁夏大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaojunsyt
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可吸收水分减少导致水胁迫,植物对水分胁迫产生响应适应胁迫条件,以往研究尽管已识别了一些胁迫响应基因,但其无法解释多样的植物对水胁迫的适应。渗调蛋白OSM通过真菌细胞壁渗透到质膜,消除其pH梯度,从而产生抗菌功能。此外,研究显示盐胁迫下植物体内OSM积累。   本实验室在筛选干旱胁迫马铃薯消减cDNA文库时,识别了文库中高频出现的OSM基因EST,BLAST检索发现其与OSM-3b100%同源,据记载OSM-3b是晚疫病抗性相关基因,检索结果未见其与水胁迫响应的相关报道。本研究旨在分离获得OSM-3b基因全长cDNA,揭示其水胁迫的响应功能,研究结果如下:   从马铃薯幼茎中分离获得的OSM-3b的cDNA亚克隆于原核表达载体pET-28c中,构建了OSM-3b原核表达载体pET-28c-OSM,获得了的重组菌株DH-OSM。   DH-OSM在NaCl和PEG浓度梯度下OSM-3b的表达检测结果显示,在NaCl浓度1%以上随盐浓度升高,OSM-3b mRNA的表达逐渐下降;在PEG浓度从0.25%升至4.0%,OSM-3b的mRNA表达明显上升。在NaCl胁迫和PEG浓度梯度渗透胁迫下,重组菌株DH-OSM菌的菌落存活数统计分析结果显示,在不同浓度NaCl下重组菌的菌落存活数与对照趋势一致,重组菌菌落存活数峰值出现在2.0%的PEG浓度,而对照菌峰值则出现在0.5%的PEG浓度。   这些结果表明,OSM-3b在大肠杆菌中表达对NaCl胁迫没有响应,但可缓冲渗透胁迫对其存活的影响。   将OSM-3b置于pCAMBIA130535S启动子下游,构建了转化载体pCAMBIA1305-OSM。通过农杆菌介导法导入马铃薯体内,PCR检测筛选出7个阳性转化子。这些株系将有待进一步研究。
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