烟草脉带花叶病毒山东分离物全基因组序列测定及分析

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烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV)属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus, PVY),主要侵染茄科植物。近年来,TVBMV在山东省烟草生产上的发生呈现上升趋势,但目前关于TVBMV全基因组的研究仅限于云南省分离物YND和河南分离物HN39,不利于充分了解TVBMV在山东省的群体结构以及对其开展防治工作。2009年和2010年,我们从山东省沂水、沂南、莒县、费县、莒南、诸城、平邑、昌乐、莱芜和沂源烟区采集到表现脉带花叶症状的烟草样品,分别通过5次反转录和一次5’-RACE,首次获得10个TVBMV山东省分离物的基因组全序列。与GenBank上登录的TVBMV分离物的序列进行比对分析。主要研究结果如下:1.核苷酸和氨基酸序列一致率比对结果表明,TVBMV具有明显的空间分布性,云南分离物与其他地区分离物的序列一致率低得多,但3’-UTR相对很保守。2.根据TVBMV全基因组序列、HC-Pro、P3、6K1和CP基因分别构建系统进化树,结果均表明,云南分离物单独组成一组,TVBMV系统进化存在着空间分布性。基于更多的序列的分析,我们得到了不同于以往研究的分组情况。基于HC-Pro,可将TVBMV分为Ⅰ组和Ⅱ组两个大组,Group I又可分为山东A组(SDA)、陕甘组(SG)和山东B组(SDB)三个亚组,云南分离物独自组成Ⅱ组;基于P3和6K1,可将TVBMV分为Ⅰ组和Ⅱ组两个大组,云南分离物独自组成Ⅱ组,Group I由山东组(SD)和陕甘组(SG)组成;基于CP,可将TVBMV分为三个大组,Ⅰ组又可分为陕甘组(SG)和山东组(SD)两个亚组,云南分离物和国外分离物各独自成组。3.通过重组分析,我们发现3个TVBMV分离物发生明显的重组事件,并且发现了TVBMV基因组中新的重组位点。除Zhang等报道的重组位点外,TVBMV在HC-Pro的3’末端、CI的3’末端、VPg的5’末端和NIb的5’末端也存在重组现象。3个TVBMV重组分离物大部分重组位点发生在基因编码区连接之部位,符合基因的模块进化理论。4.计算TVBMV山东省分离物所有编码基因的dN/ds值和种群发生状态。结果表明,TVBMV整个阅读框dN/ds值均小于1.0,处于负向选择状态,P1基因所承受的选择压力最强,而HC-Pro最弱;种群处于一个长期存在的稳定状态。5.通过序列分析发现,不同地域分布的分离物基因序列3’-UTR的一致率最为稳定,可能是应用于抗TVBMV的最佳基因区段。
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