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第一部分DKK1参与氟化钠所致认知功能损伤目的评判高氟饮水地区老年人群认知功能障碍的风险因素,明确DKK1是否参与氟化钠所致认知功能障碍。方法使用MoCA-B量表和AD-8量表分别对高氟饮水地区(高氟组)和正常饮水地区(正常组)老年人群(60岁以上)共578例进行认知功能测试,其中高氟组371例,正常组201例;同时采集一般信息,并抽取静脉血5ml*4,分别使用氧化应激试剂盒检测指标SOD,GSH和MDA的水平,血氟浓度测定,qRT-PCR检测DKK1的表达水平以及APOE的基因多态性。结果(1)高氟组老年患者的认知功能量表评分的异常率均高于正常组。(2)高氟组老年患者的血氟水平高于正常组,但两者都未达到氟化物的中毒剂量。(3)与正常组相比,高氟组DKK1的mRNA水平明显高于正常组。(4)高氟组抗氧化指标SOD和促氧化指标MDA高于正常组。(5)氟化物所致认知功能损伤可能的风险因素是年龄、文化程度和氟斑牙。结论高氟饮水能够导致认知功能损伤,其损伤的机制可能有DKK1参与。第二部分 EGb-761通过DKK1保护氟化钠对PC-12细胞的损伤目的观察氟化钠对PC-12细胞的损伤情况,并研究EGb-761在氟化钠所致细胞损伤中的作用。方法不同浓度氟化钠在不同时间点(0,6h,12h,24h,48h)干预PC-12细胞,用CCK8检测细胞活性,并构建氟化钠所致神经损伤的细胞模型。Westernblot检测在EGb-761干预氟化钠所致细胞损伤模型中经典wnt信号通路蛋白,GSK-3β、p-GSK-3β和β-catenin以及经典的wnt信号通路抑制剂DKK1的表达。结晶紫染色和流式细胞分析检测细胞增殖和凋亡情况。结果(1)低浓度氟化钠(<500 μM)作用24h后对PC-12细胞的活性无影响,高浓度氟化钠(1000-2000 μM)抑制PC-12细胞的活性,EGb-761和氯化锂(LicL)能够减轻高浓度氟化钠对PC-12细胞的抑制。(2)氟化钠增加DKK1和减少β-catenin在PC-12细胞中的表达。(3)氟化钠抑制PC-12细胞的增殖并促进凋亡,EGb-761预处理后氟化钠抑制细胞增殖和促进凋亡的作用减轻。(4)EGb-761和LicL预处理氟化钠所致细胞损伤模型,DKK1和p-GSK-3 β的表达下降,β-catenin表达增加;核内蛋白C-myc和CyclinD表达增加。结论DKK1在氟化钠抑制PC-12细胞的增殖和促进凋亡发挥重要作用。EGb-761能够通过抑制DKK1激活wnt信号,减轻氟化钠引起的细胞损伤,从而发挥细胞保护作用。