【摘 要】
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目的探寻CHAF1A在宫颈癌中的表达、作用及相关机制。方法通过RT-PCR检测宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中CHAF1A和ERα的m RNA表达,免疫组织化学染色法检测CHAF1A和ERα在宫颈癌组织中的蛋白表达情况;分析两个基因的表达与临床特征关系,了解其临床意义;进一步根据其表达情况,进行二者的统计分析,了解其表达的相关性。根据CHAF1A在宫颈癌细胞及人正常永生化上皮细胞中的表达,选取Sih
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目的探寻CHAF1A在宫颈癌中的表达、作用及相关机制。方法通过RT-PCR检测宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中CHAF1A和ERα的m RNA表达,免疫组织化学染色法检测CHAF1A和ERα在宫颈癌组织中的蛋白表达情况;分析两个基因的表达与临床特征关系,了解其临床意义;进一步根据其表达情况,进行二者的统计分析,了解其表达的相关性。根据CHAF1A在宫颈癌细胞及人正常永生化上皮细胞中的表达,选取Siha和He La细胞进行细胞功能学实验;用慢病毒干扰宫颈癌细胞内CHAF1A的表达,与转染阴性对照病毒的细胞进行对照研究,RT-PCR和Western blot验证明确有效转染效果后予以细胞克隆形成实验、CCK8实验、RTCA（增殖）检测细胞增殖情况;流式细胞仪细胞周期及凋亡情况;划痕实验、RTCA（迁移）实验检测CHAF1A对细胞侵袭力的影响。根据CHAF1A在宫颈癌细胞中的生物学表现,进一步用Western blot检测增殖相关信号通路中与增殖、凋亡相关的关键分子表达水平的变化;为进一步阐明CHAF1A上下游作用关系,运用Western blot检测CHAF1A表达敲低后ERα表达的变化。结果CHAF1A和ERα在CSCC中均有差异表达,CHAF1A在CSCC中的表达趋势是:随着宫颈癌进展表达阳性率升高,CHAF1A表达升高,且与宫颈癌分期及分化相关,P<0.05,差异有统计学意义,而ERα随着宫颈癌进展表达阳性率明显下降,ERα与患者宫颈癌分期,分化程度和淋巴结转移相关（P<0.05）,与患者年龄和浸润深度无明显相关性,统计无差异,利用Spearman检验,r为–0.300两者的表达具有负相,P<0.05,有统计学意义。RT-PCR检测宫颈癌各细胞株及人永生化上皮细胞Ha Ca T细胞中CHAF1A的表达情况显示,CHAF1A在宫颈癌细胞株中的表达高于Ha Ca T细胞株;选取其中表达升高的Si Ha和He La细胞株予以慢病毒敲低CHAF1A的表达,与阴性对照病毒转染的细胞对照进行细胞功能实验,结果提示CHAF1A的表达降低明显抑制了宫颈癌细胞的增殖活力,促进细胞凋亡,使细胞周期中S期细胞减少;并且宫颈癌细胞的迁移能力降低。进一步用Western blot检测增殖相关信号通路关键分子表达情况显示CHAF1A敲除后磷酸化的PI3K（tyr458）和Akt（ser473）水平明显下降,而总蛋白中的PI3K和Akt水平保持不变,总Fox O1水平保持不变,磷酸化的Fox O1水平升高,进一步检测与凋亡相关的Bcl-2基因的表达在CHAF1A基因表达降低后也明显降低,促进凋亡的BAX表达则升高;同时敲低CHAF1A后ERα表达升高,二者表达呈负相关关系。结论CHAF1A在宫颈癌组织和细胞中表达均较正常组织和细胞升高;升高的CHAF1A的表达介导宫颈癌的恶性生物学行为;CHAF1A负向调控ERα表达。
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