【摘 要】
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CD4属于Ig超家族，为细胞膜表面单链糖蛋白，是HIV的主要受体。CD4+T细胞参与大多数自身免疫性疾病的发生，而抗CD4的抗体可清除或抑制CD4+T细胞，从而调节异常的T细胞应答。国外已对
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CD4属于Ig超家族，为细胞膜表面单链糖蛋白，是HIV的主要受体。CD4+T细胞参与大多数自身免疫性疾病的发生，而抗CD4的抗体可清除或抑制CD4+T细胞，从而调节异常的T细胞应答。国外已对鼠源性抗CD4单抗用于治疗类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮等自身免疫性疾病进行了广泛而深入的研究，临床疗效良好。但是，鼠源性单抗应用于人体治疗将引起人抗鼠抗体(HAMA)反应，反复使用可导致人体产生过敏反应且降低治疗效果，将鼠单抗改造为人-鼠嵌合抗体能降低HAMA反应。嵌合抗体临床试用的大量研究表明，它临床疗效好，免疫原性与其它人源化抗体相似，而亲和力常常高于其它人源化抗体。
本研究首先对质粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH进行双酶切及DNA测序鉴定，证实其为含有鼠源性可变区和人源恒定区的嵌合抗体轻、重链表达载体。然后，绘制SP2/0细胞生长曲线确定SP2/0细胞最适生长条件，并通过抗生素筛选SP2/0细胞浓度的摸索，确定了组胺醇、霉酚酸联合筛选对SP2/0细胞的最低致死量为3.5mmol/L+1.1ug/ml。接着，采用电穿孔转染质粒DNA的方法，将制备好的线性质粒PAH4604+CD4VH和PAG4622+CD4VL共转染SP2/0细胞，通过组胺醇、霉酚酸联合筛选4～6周，获得了0925CASP2/0和1107CASP2/0两株阳性SP2/0细胞株。最后，通过ELISA、流式细胞术、RT-PCR和DNA测序的方法对0925CASP2/0和1107CASP2/0细胞进行了初步鉴定。结果表明，本研究成功地在真核细胞SP2/0中表达了抗人CD4人-鼠嵌合抗体，表达产量为1～2ng/ml。
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