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在成功制备铁营养、锌营养两种罗非鱼动物模型的基础上,观察缺铁、缺锌以及高铁、高锌对奥尼罗非鱼幼鱼(Oreochromis aureus×O.niloticus)空间学习记忆能力、抗氧化功能、免疫机能、生长性能等的影响,重点探讨不同铁、锌水平对罗非鱼幼鱼学习记忆功能神经生化基础中涉及的几类单胺类神经递质、单胺氧化酶(MAO)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、一氧化氮合酶(NOS)及一氧化氮(NO)含量等的影响,以期阐明铁、锌对罗非鱼幼鱼学习记忆功能影响的神经生化调控机制。主要研究结果如下: 1、饲料铁水平及不同的摄食量对奥尼罗非鱼幼鱼的生长性能、血液指标及消化酶活性的影响 在4、8、12周三个不同的监测周期下,实验鱼生长状况结果基本一致。缺铁组(ID)体重增重率(WG)和特定生长率(SGR)显著低于高铁组(IO)(P<0.05);ID组红细胞浓度(RBC)显著低于IO组(P<0.05); ID组血红蛋白(Hb)含量低于IO组,但无显著性差异,ID组Hb含量显著低于CN组(P<0.05)。 实验鱼肠中淀粉酶(AMS)活性显著高于肝胰脏和胃的(P<0.05),在肠、肝胰脏和胃中,ID组AMS活性显著低于对照组(CN)(P<0.05);实验鱼脂肪酶(LPS)活性大小依次为胃>肝胰脏>肠,差异显著(P<0.05);实验鱼胃蛋白酶(Pep)活性大小依次为胃>肝胰脏>肠,差异显著(P<0.05),在肠、肝胰脏和胃中,ID组Pep活性低于CN组,差异显著(P<0.05);实验鱼胰蛋白酶(Try)活性大小表现为肝胰脏>胃,肠>胃,差异显著(P<0.05)。 实验鱼酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性在不同的养殖时段下均表现为肝胰脏>血清,脑>血清,差异显著(P<0.05),血清中ID组AKP活性显著低于IO组(P<0.05)。 2、铁营养状况评价 在不同的监测周期下,铁营养状况实验结果基本一致。饲料铁补充量对鱼体血清铁浓度没有显著性影响;ID组总铁结合力(TIBC)显著高于IO组(P<0.05),说明ID组血清中转铁蛋白(Tf)结合铁量显著高于IO组(P<0.05);与肌肉、脊椎骨、脑相比,肝胰脏中铁含量最高。随着饲料中铁补充量的增加,肝胰脏、肌肉和脊椎骨中铁元素含量呈现出增加的趋势,而脑中铁元素含量呈现出降低的趋势,ID组和IO组之间差异均显著(P<0.05)。 3、铁水平对奥尼罗非鱼幼鱼学习记忆功能的影响 在4、8、12周三个不同的监测周期下,行为学实验结果基本一致。学习记忆实验:均表现为随着饲料铁水平的升高,ID组、CN组、IO组平均消耗时间呈降低趋势,差异显著(P<0.05),而缺铁对喂组(PFd)平均消耗时间显著低于ID组(P<0.05),高铁对喂组(PF(o))平均消耗时间显著高于IO组(P<0.05)。随着训练时间的延长,平均消耗时间也呈降低趋势,其中第6-7 d的平均消耗时间显著低于第1-4 d的(P<0.05)。对正确率的统计结果表明,随着训练时间的延长,每一个实验组方向选择的正确率均表现出明显上升的趋势。在整个学习记忆实验过程中,IO组方向选择的正确率最高,ID组的最低,差异显著(P<0.05)。记忆验证实验:取消食物报偿后,随着训练时间的延长,各实验组正确率均下降,在整个记忆验证实验中,ID组的正确率显著低于其他四组(P<0.05)。 4、铁水平对奥尼罗非鱼幼鱼抗氧化能力的影响 在不同的养殖时段下,ID组实验鱼血清、肝胰脏和脑谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著低于CN组(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著高于CN组(P<0.05)。 5、铁水平对奥尼罗非鱼学习记忆功能的神经生化基础的影响 在不同的养殖时段下,ID组实验鱼脑组织去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)等单胺类神经递质含量显著低于IO组(P<0.05); MAO活性变化与单胺类神经递质的变化基本相反,ID组实验鱼脑、血清和肝胰脏MAO活性显著高于IO组(P<0.05);脑组织的AChE活性变化与血清的恰好相反,在养殖的4、12周,ID组实验鱼脑组织AChE活性显著高于IO组(P<0.05),ID组实验鱼血清AChE活性显著低于IO组(P<0.05); ID组实验鱼脑组织和血清TNOS活性显著低于IO组(P<0.05),NO含量也显著低于IO组(P<0.05)。 6、饲料锌水平及不同的摄食量对奥尼罗非鱼幼鱼的生长性能、血液指标及消化酶活性的影响 在4、8、12周三个不同的监测周期下,实验鱼生长状况结果基本一致。缺锌组(ZD) WG和 SGR显著低于高锌组(ZO)(P<0.05); ZD组RBC显著低于ZO组(P<0.05);随着饲料中锌补充量的增加,AMS活性总体呈上升趋势,在肠、肝胰脏和胃中,ZD组AMS活性显著低于ZO组(P<0.05);与CN组和ZO组比较,ZD组LPS活性显著降低(P<0.05); ZD组Pep活性显著低于ZO组(P<0.05);ZD组Try活性显著低于ZO组(P<0.05)。 7、锌营养状况评价 在不同的监测周期下,锌营养状况实验结果基本一致。随着饲料中锌补充量的增加,血清锌浓度呈上升趋势,ZD组血清锌浓度显著低于ZO组(P<0.05);与脊椎骨、肝胰脏、脑相比,肌肉中锌含量最高;随着饲料中锌补充量的增加,肌肉、脊椎骨、肝胰脏和脑中锌元素含量呈现出增加的趋势,且ZD组4种组织中锌浓度显著低于ZO组(P<0.05); ZD组脑AKP活性显著低于ZO组(P<0.05),ZD组血清AKP活性低于ZO组,但差异不显著。 8、锌水平对奥尼罗非鱼幼鱼学习记忆功能的影响 在4、8、12周三个不同的监测周期下,行为学实验结果基本一致。学习记忆实验:均表现为随着饲料锌水平的升高,ZD组、CN组、ZO组平均消耗时间呈降低趋势,差异显著(P<0.05),而缺锌对喂组(PFd)平均消耗时间显著低于ZD组(P<0.05),高锌对喂组(PFo)平均消耗时间显著高于ZO组(P<0.05)。随着训练时间的延长,平均消耗时间也呈降低趋势,其中第6-7 d的平均消耗时间显著低于第1-4 d的(P<0.05)。对正确率的统计结果表明,随着训练时间的延长,每一个实验组方向选择的正确率整体呈上升的趋势。在学习记忆实验过程中,第2-7 d ZO组方向选择的正确率最高,ZD组的最低,差异显著(P<0.05)。记忆验证实验:取消食物报偿后,随着训练时间的延长,各实验组正确率均下降,在整个记忆验证实验中,ZD组的正确率显著低于其他四组(P<0.05)。 9、锌水平对奥尼罗非鱼幼鱼抗氧化能力的影响 ZD组实验鱼血清、肝胰脏和脑CAT活性和T-AOC显著低于CN组(P<0.05),ZD组实验鱼血清、脑GSH-Px活性显著低于ZO组(P<0.05),ZD组实验鱼血清、肝胰脏和脑MDA含量高于ZO组。 10、锌水平对奥尼罗非鱼学习记忆功能的神经生化基础的影响 在不同的养殖时段下,ZD组实验鱼脑组织NE、5-HT、DA等单胺类神经递质含量显著低于ZO组(P<0.05); MAO活性变化与单胺类神经递质的变化基本相反,ZD组实验鱼脑、血清和肝胰脏MAO活性显著高于ZO组(P<0.05);脑组织的AChE活性变化与血清的恰好相反,随着饲料中锌补充量的增加,脑AChE活性下降,血清AChE活性升高,ZD组实验鱼脑组织AChE活性显著高于CN组、ZO组(P<0.05),ZD组实验鱼血清AChE活性显著低于ZO组(P<0.05);ZD组实验鱼脑组织和血清TNOS活性显著低于ZO组(P<0.05),NO含量也显著低于ZO组(P<0.05)。 本论文通过投喂不同水平和数量的铁、锌饲料建立了铁、锌营养罗非鱼模型,观察了铁缺乏、铁过量以及锌缺乏、锌过量对鱼类学习记忆能力的影响,为从营养学角度研究鱼类空间学习记忆功能提供基础资料。研究结果也为指导实践生产合理补铁、补锌提供一定的理论依据。