KCNQ1单核苷酸多态性对microRNA调控其作用的影响

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hf4057
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目的:阐明KCNQ1基因3’UTR上的单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism,SNP)位点(+422976、+2519184和+8234)对microRNA(miRNA)调节KCNQ1表达的影响:以及SNP+2519184与房颤发生的相关性。   方法:1、盐析法提取正常健康人体DNA,设计引物扩增KCNQ1基因。2、根据PolymiRTs Database查找出KCNQ1基因3’UTR上的SNP位点并进行突变。3、分子克隆方法构建KCNQ1质粒及其含有SNP突变位点的质粒。4、Luciferase技术检测miRNA对KCNQ1与突变后的KCNQ1的调控区别。5、对湖北武汉协和医院心内科690例房颤患者和496例健康人群进行基因组DNA提取,使用高分辨熔解曲线分析SNP分型,对SNP+2519184进行房颤病例对照关联分析。   结果:1、miR-342对含SNP+422976(C)和SNP+422976(G)的KCNQ1基因质粒的荧光素酶活性均无影响,加入AMO-342亦无对抗miR-342的作用;2、miR-328对含SNP+2519184(G)的KCNQ1基因质粒荧光素酶活性无影响。KCNQ1基因3’UTR SNP+2519184位点的碱基为A时,miR-328能显著抑制嵌合载体荧光素酶活性,加入AMO-328则对抗miR-328的作用;3、miR-380对含SNP+8234(G)及(A)的KCNQ1基因质粒荧光素酶活性均无影响,加入AMO-380亦无对抗miR-342的作用;4、通过房颤患者和正常人群的抽样分析、等位基因关联研究、不同基因型与AF之间关联研究,发现在总房颤AF和孤立性AF分组里SNP+2519184等位基因均与AF不相关;在不同遗传模式下,SNP+2519184不同基因型与总AF和孤立性AF均不相关。   结论:1、miRNA328可以调控含有SNP+2519184(A)的KCNQ1基因,降低其表达;2、关联研究结果表明,SNP+2519184位点与中国湖北武汉人群房颤发生不相关。
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