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炎症性肠病(IBD)主要是指一组以肠道炎症为特征的慢性肠道疾病。临床上主要分为克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)两种。随着肠道炎症的反复、持续发作,肠道慢性损伤的逐渐加重,肠道也会逐渐发生重构,最终由肠道炎症形成肠道纤维化。不仅丧失了基本功能,而且容易出现各种临床伴随疾病。肠壁纤维化所致的肠腔狭窄是炎症性肠病病变不可逆和手术治疗的首位病因。有证据表明,持续的内质网应激(ERS)与纤维化相关,是纤维化的可能机制之一。而且ERS在肺、肾、肝等组织纤维化中都有重要作用。同时很多研究表明在IBD肠道纤维化过程中,存在着明显的菌群紊乱,这种菌群紊乱可以导致持续ERS的增加。因此,我们想探究是否是菌群紊乱带来的ERS导致了IBD肠纤维化,且在这个过程中我们通过改善菌群紊乱是否可以改善肠道纤维化过程。为此,我们分别设计了以下三部分实验,分别探究在临床UC患者的结肠标本中,明显狭窄处ERS的表达；在TNBS诱导的肠纤维化小鼠模型中,调节ERS是否可以改变纤维化；以及在TNBS诱导的肠纤维化小鼠模型中,调节菌群,是否可以改善ERS的表达和肠道纤维化过程。具体三部分如下：第一部分研究临床溃疡性结肠炎非活动期患者结肠狭窄处内质网应激的表达目的：研究在临床UC非活动期患者结肠标本中,狭窄处内质网应激的表达,探讨在ERS在UC结肠狭窄中的作用。方法：选用临床UC非活动期结肠标本,分别选取其狭窄处与非狭窄处,并与结肠癌患者正常结肠标本进行对比。通过HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色及Western blot来检测各组黏膜厚度、胶原沉积、上皮标记、纤维化标记及ERS相关蛋白的表达情况。探究ERS在UC患者结肠狭窄处的作用。结果：实验发现相比结肠癌患者结肠癌患者正常结肠标本,UC非狭窄处结肠,黏膜仅轻度增厚,黏膜结构基本正常,ERS表达轻度增高。而UC狭窄处结肠组织黏膜紊乱严重,黏膜增厚明显,尤其是黏膜下层更为显著,胶原外沉积更多,纤维化明显,且ERS表达明显增高。结论：UC患者结肠狭窄处纤维化明显增强,ERS是UC患者结肠纤维性狭窄的重要机制。第二部分在TNBS导致的IBD肠壁纤维化模型中调节内质网应激对肠壁纤维化的影响目的：建立TNBS导致的IBD肠壁纤维化模型,并在此模型基础上探究调节内质网应激对肠壁纤维化的影响。方法：在这部分动物实验中,我们采用了TNBS灌肠来建立IBD慢性肠炎肠纤维化模型。并观察在加入了ERS保护剂熊去氧胆酸(TUDCA)后对结肠纤维化及ERS的影响。分别通过HE染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色及Western blot来检测各组黏膜厚度、胶原沉积、上皮标记、纤维化标记及ERS相关蛋白的表达情况。验证ERS在TNBS导致的肠纤维化模型中的作用。结果：实验发现相比对照组,单纯TNBS造模组小鼠结肠黏膜明显增高,尤其以黏膜下层最为显著；胶原沉积明显增多,以Ⅲ型胶原为主；上皮表达减弱,纤维化标记明显；且ERS相关蛋白表达明显增加。而在加入ERS保护剂TUDCA后,相比单纯造模组,小鼠结肠黏膜变薄,胶原沉积减少,上皮标记升高,纤维化标记变弱,且ERS相关蛋白也明显减弱。结论：在TNBS导致的IBD肠壁纤维化模型中,ERS保护剂TUDCA可以减弱TNBS诱导的肠纤维化,ERS是TNBS诱导的肠纤维化的重要机制。第三部分在TNBS导致的IBD肠纤维化模型中,改善肠道菌群紊乱,对肠道纤维化的影响,且ERS在其中的作用目的：在TNBS诱导的IBD慢性肠炎肠纤维化模型中,通过改善肠道菌群紊乱,观察对ERS及肠道纤维化的影响。方法：在这部分试验中,我们在TNBS诱导的IBD肠纤维化模型基础上,通过饮水中加入果胶和丁酸钠来调节菌群,观察他们对肠道纤维化和ERS的影响。分别通过HE染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色及Westernblot来检测各组黏膜厚度、胶原沉积、上皮标记、纤维化标记及ERS相关蛋白的表达情况。并通过小鼠粪便进行菌群分析来验证各组肠道菌群的变化情况。结果：实验发现,相比对照组,单纯TNBS造模组小鼠结肠黏膜明显增高,尤其以黏膜下层最为显著；胶原沉积明显增多,以Ⅲ型胶原为主；上皮表达减弱,纤维化标记明显；且ERS相关蛋白表达明显增加。而在加入了果胶和丁酸钠后,相比单纯造模组,小鼠结肠黏膜变薄,胶原沉积减少,上皮标记升高,纤维化标记变弱,且ERS相关蛋白也明显减弱。而且通过肠道菌群分析证实了在单纯TNBS造模组肠道菌群明显紊乱,菌群多态性减弱,条件致病菌明显增多。而在加入果胶和丁酸钠后,肠道菌群紊乱改善,菌群多态性增加,条件致病菌减少。结论：在TNBS导致IBD肠纤维化模型中,果胶和丁酸钠可以减轻TNBS诱导的菌群紊乱,且可以进一步减弱ERS的表达,减轻肠纤维化。结合前两部分研究进一步验证在IBD中,肠道菌群紊乱导致持续内质网应激,是IBD肠道纤维化的机制之一。且改善肠道菌群紊乱,可以有效减轻肠道的持续ERS,从而减轻肠道纤维化过程。