【摘 要】
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目的由各种原因导致的骨缺损问题是目前临床上的一个难题,但现有的解决方法弊端很多。神经肽Y可以促进干细胞向成骨细胞分化,本实验通过神经肽Y与人脐带间充质干细胞的作用来
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目的由各种原因导致的骨缺损问题是目前临床上的一个难题,但现有的解决方法弊端很多。神经肽Y可以促进干细胞向成骨细胞分化,本实验通过神经肽Y与人脐带间充质干细胞的作用来明确神经肽Y对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响,并尝试构建新型的骨组织工程修复材料。方法本实验分为两部分,体内实验和体外实验。在体外实验中,以人脐带间充质干细胞为实验细胞,神经肽Y作为成骨诱导因子,在培养过程中通过分组观察碱性磷酸酶对成骨细胞的染色、茜素红对钙结节的染色、PCR技术对成骨相关基因的检测分析以及Western Blot技术对成骨相关蛋白的检测来观察神经肽Y是否可以促进人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化。在体内实验中,制备神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体,再选用SD大鼠为实验动物构建大鼠颅骨缺损模型,将制备成功的神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体通过外科手术的方式植入到大鼠颅骨缺损模型中。SPF动物房继续饲养,并于第30天用颈椎脱臼法处死大鼠,获取完整的颅骨标本。将标本进行Micro-CT扫描,观察神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体对大鼠颅骨缺损的修复作用。结果通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色、PCR及Western Blot观察到神经肽Y可以促进碱性磷酸酶的合成以及钙结节的形成,并且可以促进蛋白Runx2以及β-catenin的合成,并且在神经肽Y的浓度为10-12mmol/L时的其促进作用最强,加入神经肽Y抑制剂后,这一现象被抑制。在体内,植入神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体的实验组在经过30天以后,颅骨缺损处直径明显小于空白对照组,说明神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体对大鼠颅骨缺损有修复作用。结论在体外,神经肽Y可以促进脐带间充质干细胞向成骨细胞分化,并且神经肽Y的浓度为10-12mmol/L时的其诱导成骨的作用最强;在体内,神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体可以促进大鼠颅骨缺损的修复。
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