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第一部分99Tcm-K237的制备及其小鼠体内分布
目的:探索99Tcm标记多肽K237的方法,研究标记物的稳定性及其小鼠体内的代谢分布情况。
方法:采用99Tcm直接标记多肽K237。探索不同标记条件下产物的标记率、放化纯、体外稳定性及其生物学活性改变。正常小鼠尾静脉注射99Tcm-K237(2.96 MBq,0.1 ml)后30 min和1、2、4、8及24 h后处死,取血液及主要脏器,称重并测量放射性,测定其每克组织百分注射剂量率(％ID／g)。将99Tcm-K237(5.55 MBq,0.1 ml)经荷人肺癌A549裸鼠尾静脉注射,于注射后1、2、3、5及8 h显像。
结果:本实验条件下得到99Tcm-K237的标记率和放化纯均>95％,其与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的最高特异性结合率为40.36％。99Tcm-K237在生理盐水和正常人血清中放置24 h后,其放化纯分别为(89.1±1.4)％和(88.3±1.1)％,二者差异无统计学意义。静脉注射99Tcm-K237后24 h内,小鼠血液放射性清除迅速,放射性主要聚集在肾脏并经其清除,其它组织器官的放射性随时间逐渐降低。99Tcm-K237荷人肺癌A549裸鼠显像示肿瘤组织摄取高,不同时间的肿瘤／对侧正常组织放射性计数比值(T／NT)最高可达3.97±0.31。
结论:99Tcm-K237易于制备,标记率高,体内外稳定性好,具有较理想且符合实际的动物体内动力学表现,可望成为一种新的靶向性肿瘤血管生成显像剂。
第二部分131I-K237的制备及其在荷人肺癌裸鼠中的生物分布
目的:探索131I标记多肽K237的方法,研究标记物131I-K237的稳定性及其荷人肺癌A549裸鼠体内的生物学分布。
方法:采用Iodogen法131I标记多肽K237,人奇静脉内皮细胞(HUVEC)增值抑制试验和竞争抑制试验检测131I-K237的生物活性。将131I-K237经荷人肺癌A549裸鼠尾静脉注射后于不同时间处死,取肿瘤及主要脏器,测定各组织中每克组织的放射性百分注射剂量率(％ID／g)。
结果:本实验条件下得制备的131I-K237标记率为(60.16±1.21)％,经分离纯化后其放化纯为(96.87±0.82)％。分别在生理盐水和正常人血清中放置24 h后,131I-K237的放化纯仍>90％。HUVEC增值抑制试验显示不同浓度下131I-K237与未标记K237的抑制率均无明显差别。131I-K237经荷瘤裸鼠尾静脉注射后,血液中放射性清除迅速,肾脏相对高摄取。给药后肿瘤／对侧相应部位肌肉组织的放射性比值(T／N)随时间延长而逐渐升高,12 h达到最高为4.31,24 h仍有4.19。
结论:131I-K237易于制备,具有较理想的动物体内动力学和对肿瘤的高亲和性,是一具有潜在的新型靶向性肿瘤血管生成显像和治疗药物。
第三部分131I标记K237靶向治疗荷人肺癌裸鼠的实验研究
目的:观察多肽K237及131I标记K237(131I-K237)对荷人肺癌A549裸鼠肿瘤靶向和放射性核素双重治疗的疗效。
方法:25只实验鼠建立荷人肺癌A549瘤裸鼠模型后,随机分成5组,分别为对照组(生理盐水)、131I组(11.1 MBq131I)、K237组(40μg)、131I-K237静脉组(含K23740μg,11.1 MBq131I),以上各组均经裸鼠尾静脉给药,及131I-K237瘤体内注射组(含K23740μg,11.1 MBq131I)。各实验鼠均于15天后再次给药,剂量与第一次相同,定期测量肿瘤体积。实验至第31天处死小鼠,比较肿瘤的体积,计算抑瘤率,并通过生物化学、免疫组织化学及病理组织学等方法检测131I-K237对肿瘤生长的抑制作用及其对正常组织器官的放射毒副作用,检测CD34在各组肿瘤组织中的表达。两样本均数比较行成组设计t检验,多组均数比较用单因素方差分析。
结果:治疗结束时,131I-K237静脉和瘤体内注射组、K237组及131I组的抑瘤率分别为75.01％、78.99％、31.15％、12.61％。131I-K237静脉和瘤体内注射组肿瘤平均体积较小,与生理盐水对照组、K237组和131I组比较,差异均有统计学意义。病理检查显示131I-K237治疗组和K237组肿瘤细胞发生明显坏死；未发现肝、肾和血液的辐射损伤效应。
结论:131I-K237对荷人肺癌裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,未发现明显的毒副作用。