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目的 研究特异性小干扰RNA（siRNA）对体外培养的肿瘤细胞血管生成的关键性基因的抑制作用,并对RNA干扰技术在肿瘤治疗领域中应用的可能性进行初步探讨。 方法 1.体外转录siRNA:选择血管内皮生长因子（VEGF）基因为靶基因,设计针对VEGFmRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸,体外转录合成siRNA 2.将siRNA转染入靶细胞:以HT-29人大肠癌细胞系为靶细胞,使用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞。 3.观察转染后癌细胞的变化:MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测转染后VEGFmRNA表达水平的变化,ELISA检测VEGF蛋白表达的下降效果。 结果 1.体外转录的针对VEGFmRNA两个靶位点的siRNA经脂质体转染入肿瘤细胞后均能有效抑制肿瘤细胞的生长,而作为阴性对照组的错义序列siRNA完全不起作用。 2.转染后24小时用MTT法检测各组HT-29细胞代谢率的统计结果显示:低、中、高剂量组的MTT代谢率明显低于正常对照组,与错义对照组(即siRNASCR组)比较有高度统计学意义（P<0.01）;极高剂量组的MTT代谢率也低于错义对照组,其与错义对照组比较有统计学意义（P<0.05）。错义序列组、脂质体组与正常对照组比较没有显著差异（P>0.05）。 3.转染后24小时siRNA1和siRNA2组的RT-PCR结果显示其VEGFmRNA表达量明显下降。 4.转染后24小时siRNA1和siRNA2组的VEGF分泌含量明显低于错义对照细胞组等其它3组,siRNA1和siRNA2组与错义对照组比较有统计学意义。 结论 1.应用生物软件所设计出来的针对两个靶位点的siRNA均能有效抑制VEGF蛋白的表达和HT-29细胞的增殖。