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核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary]是一种世界性分布的植物病原真菌,能引起多种作物菌核病,造成严重的经济损失。盾壳霉（Coniothyrium minitans）是核盘菌的一种重寄生真菌,可用于防治作物菌核病。双组份组氨酸激酶（Two-component histidine kinases,HKs）参与调控真菌体内多种生命活动,但双组份组氨酸激酶对盾壳霉的生长发育、重寄生、杀菌剂抗性有何影响,目前尚不清楚。本研究采用PEG介导的原生质体转化技术对盾壳霉双组份组氨酸激酶Cm HK03基因进行了敲除、互补和超表达,对Cm HK03在盾壳霉菌丝生长发育、重寄生、抗药性、响应高渗胁迫中的作用进行了分析,取得的主要研究结果如下:1. 杀菌剂敏感性测定表明:Cm HK03的敲除导致盾壳霉对二甲酰亚胺类和苯吡咯类杀菌剂的抗药性显著增强,而对三唑类、嘧啶类、咪唑类、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的敏感性没有变化。2. 渗透压敏感性测定表明:Cm HK03敲除突变体对高渗胁迫（1 M山梨醇、1 M葡萄糖）和高盐胁迫（0.6 M Na Cl、0.6 M KCl）表现敏感。其他非生物胁迫敏感性测定表明:Cm HK03敲除突变体对Ca Cl2（0.2 M）、H2O2（8 m M）、CFW（150μg/m L）和CR（50μg/m L）的敏感性没有显著变化。菌丝NBT染色结果表明:Cm HK03基因的敲除和超表达对盾壳霉菌丝内ROS含量没有显著影响。3. 菌丝内甘油含量测定表明:用1 M山梨醇处理5 h时,盾壳霉野生型和Cm HK03敲除突变体菌丝甘油含量显著升高,但Cm HK03敲除突变体菌丝中甘油含量显著低于野生型。而用5μg a.i./m L咯菌腈处理5 h时,野生型和Cm HK03敲除突变体菌丝中甘油含量均未发生显著变化。这说明Cm HK03可能参与调控甘油的合成来响应渗透压胁迫。4. RT-q PCR结果显示,咯菌腈（5μg/a.i.m L）处理12 h后,野生型中Cm HK03,Sho1和Hog1分别上调表达6.9倍,1.83倍和2.06倍;而在Cm HK03敲除突变体中,Sho1和Hog1却分别下调表达0.34倍和0.72倍。这说明Cm HK03参与杀菌剂抗性调控可能Hog1信号通路有关。5. 草酸敏感性测定表明:Cm HK03敲除突变体和超表达突变体对草酸（16m M和24 m M）的敏感性没有变化。6. Cm HK03的敲除和超表达对盾壳霉的菌丝生长发育、产孢、以及对核盘菌菌丝和菌核的重寄生能力均没有显著影响。以上研究结果表明,Cm HK03的敲除增强了盾壳霉对二甲酰亚胺类和苯吡咯类杀菌剂的抗药性,Cm HK03可能参与调控甘油的合成来响应高渗胁迫,而且Cm HK03的敲除对盾壳霉的菌丝生长发育、产孢和重寄生均没有显著影响。因此,Cm HK03敲除突变体可以与二甲酰亚胺类和苯吡咯类杀菌剂混用,来控制田间核盘菌抗药性菌株。