【摘 要】
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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引发断奶仔猪多系统衰竭综合症等相关疾病的主要病原体。PCV2开放读码框(ORF2)编码的外壳(Cap)蛋白是该病毒唯一的结构蛋白
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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引发断奶仔猪多系统衰竭综合症等相关疾病的主要病原体。PCV2开放读码框(ORF2)编码的外壳(Cap)蛋白是该病毒唯一的结构蛋白,含有特异性抗原表位,可诱导机体产生免疫答应反应,其N端具有核定位信号肽序列(nuclear localization signal,NLS),严重影响Cap蛋白在大肠杆菌中的表达。参照NCBI已发表的PCV2 ORF2基因序列,根据大肠杆菌稀有密码子的偏好性,对ORF2全基因序列进行优化和改造,通过PCR扩增出702bp ORF2基因序列,插入到表达载体pET41的PshAⅠ酶切位点中构成重组质粒pET41-Cap,经PCR和测序鉴定,将构建成功的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导重组质粒表达,通过SDS-PAGE凝胶电泳分析,Cap蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式存在。经IPTG浓度、表达时间、表达温度的优化,确定了Cap蛋白在大肠杆菌中最佳表达条件,在37℃、IPTG终浓度为1mmol/L,诱导表达4h后Cap蛋白的表达量达到最大。包涵体蛋白经洗涤后溶解于8M尿素中,变性后的蛋白在尿素浓度逐渐降低的透析液中进行稀释复性,利用镍柱亲和层析对复性后蛋白进行纯化,洗脱下的目的蛋白加入合适比例的重组肠激酶切去GST标签,得到了大小约为28kDa且相对纯净的目标蛋白Cap,经透射电镜观察,目的蛋白可自我组装成大小约为17-20nm的病毒样颗粒(VLPs)。
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