乙肝病毒表面抗原基因的克隆及在哺乳动物细胞中的表达纯化

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与原核表达系统和酵母、昆虫等其它真核表达系统相比,哺乳动物表达系统能够进行转录前的修饰加工并进行正确的折叠,因此所表达的乙肝病毒表面抗原更接近于病人血清中的天然构象。本实验从adr亚型慢性乙肝病人血清中提取病毒DNA,PCR扩增目的基因片断,用限制性内切酶EcoRI和SalI消化后将其置于真核表达载体PCI-neo的CMV启动子下方,成功构建重组质粒PCI-S,并将其转染CHO细胞进行表达。用ELISA检测并筛选到一株高稳定分泌HBsAg的细胞株。用四步层析的方法纯化细胞培养上清液得到了较高纯度的重组蛋白,为下一步乙肝疫苗的研制和检测试剂的开发奠定了基础。
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