【摘 要】
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先天性免疫系统是机体抵御病原体入侵的第一道防线。无脊椎动物由于缺乏适应性免疫系统而主要依赖于先天性免疫系统。核转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)是一种普适性存在
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先天性免疫系统是机体抵御病原体入侵的第一道防线。无脊椎动物由于缺乏适应性免疫系统而主要依赖于先天性免疫系统。核转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)是一种普适性存在的、能调节多种炎症和免疫基因表达的一种重要的转录调节因子。NF-κB在无脊椎动物的先天性免疫系统中发挥尤其重要的作用。NF-κB的激活由含特定丝氨酸位点的核因子κB抑制因子激酶IKK(inhibitor ofNF-κB kinase)组成的高分子复合物完成。IKK介导的NF-κB信号通路几乎存在于所有的动物细胞中。然而，蟹类IKK的系统鉴定研究目前尚未见报导。 利用RACE方法，本研究首次克隆了三个拟穴青蟹IKK基因的cDNA全长序列，分别命名为SpIKKβ，SpIKKε1和SpIKKε2。氨基酸序列多重比较结果表明所有SpIKK都包含IKK功能所需的保守残基和重要功能域，如激酶结构域和亮氨酸拉链基序。进化树分析显示SpIKKβ归于IKK一类，而两个SpIKKε则在IKK相关激酶分支中。胞内定位结果显示，SpIKKβ和SpIKKε1在主要分布在细胞质中，而SpIKKε2仅位于细胞质中。实时荧光定量PCR结果表明三个IKK基因在蟹的血淋巴中均为高表达，而当蟹受到生物胁迫(溶藻弧菌或poly(I∶C)刺激）或非生物胁迫（镉或干露处理）时，三个SpIKK基因的表达谱并不一致，表明三者在应对外界的病原、重金属或干露胁迫下可能扮演不同的角色。双荧光素酶报告结果表明来自蟹的IKK能显著地激活哺乳动物的NF-κB信号通路，说明IKK在激活NF-κB信号通路的功能在进化上具有高度保守性。上述结果暗示SpIKK在拟穴青蟹应对外界生物或非生物胁迫中发挥重要作用，表明IKK在甲壳类动物到哺乳类动物的先天性免疫系统中具有功能保守性。本研究为节肢动物甚至是无脊椎动物中IKK基因的起源与进化提供新的视角。
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