【摘 要】
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目的：人工合成胸腺素α1(thymosin alphal，Tα1)三串体(Tα1③)的串联基因及Ta1和Ref(一种P1噬菌体蛋白)的重组基因，克隆至原核表达载体，构建高表达菌株，利用基因工程方法实现Tα1
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目的：人工合成胸腺素α1(thymosin alphal，Tα1)三串体(Tα1③)的串联基因及Ta1和Ref(一种P1噬菌体蛋白)的重组基因，克隆至原核表达载体，构建高表达菌株，利用基因工程方法实现Tα1三串体及Ref-Tα1重组蛋白的高效表达，并进行目的蛋白的纯化及生物学活性的鉴定。方法：使用大肠杆菌偏爱密码子，人工合成Tαl③和Ref-Tα1基因，并分别克隆在表达载体pET-22b(+)和pBV220中，转化大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α，通过加入IPTG及控制温度诱导表达，表达的目的蛋白分别经DEAE-Sepharose FF阴离子柱及CM-Sepharose FF阳离子柱进行纯化，Western-blot进行鉴定，体外淋巴细胞增殖试验进行生物学活性测定。结果：PCR分别扩增出280bp和360bp的DNA片段，将其克隆入pET-22b(+)和pBV220中，酶切和测序鉴定正确。用IPTG及温控分别诱导重组质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α，各得到大小约10KD和15KD的串联及重组蛋白，合成的蛋白以可溶性形式存在，培养的细菌经收集、裂解后，合成的目的蛋白释放出来，并采用离子层析纯化，获得了纯化的目的蛋白。体外淋巴细胞增殖试验表明，两种表达蛋白都具有明显的生物学活性。结论：本研究成功地克隆、表达和纯化了Tα1③和Ref-Tα1蛋白，表明用基因串联和重组的方法表达小分子多肽是一种可行的方法，为今后的大批量生产和应用打下了坚实的基础，也为表达其它的小分子蛋白质提供了很好的方向。
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