茉莉酸类化合物诱导葡萄细胞生产白藜芦醇和人参细胞生产皂苷的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oibaggio
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利用植物细胞培养技术生产活性药用次生代谢产物是目前替代传统提取手段的一条有效途径。但是,低生产率是制约其产业化发展的核心问题。通过添加诱导剂提高植物细胞培养中次生代谢产物含量成为目前的研究热点。本论文首次在葡萄悬浮细胞中使用2,3-Dihydroxypropyl jasmonate (DHPJA)和Ttrifluoroethyl jasmonate (TFEJA)来诱导白藜芦醇的合成,并与商业化的诱导剂Methyl jasmonate (MeJA)进行比较。通过对诱导时机和诱导浓度进行优化,确定MeJA、DHPJA和TFEJA三种诱导剂的最佳诱导时机为第15天,最佳诱导浓度都为1501μM。在最佳诱导条件下,这三种诱导剂中DHPJA对细胞生长的抑制作用最弱,对白藜芦醇的诱导效果反而最好。通过检测细胞内外H202的含量和PAL酶活性的变化,证实DHPJA通过诱导葡萄悬浮细胞产生防卫反应来促进白藜芦醇合成。通过添加H202信号途径的特异性抑制剂DPI进一步证实了DHPJA通过H202信号途径起作用。H202信号途径在白藜芦醇合成中的重要作用被首次报道。并且通过添加H202信号途径的特异性抑制剂DPI成功改变了葡萄细胞次生代谢产物的多样性分布。为优化植物细胞培养产白藜芦醇的诱导策略提供新的理论基础。同时本论文还以人参悬浮细胞为模型,比较MeJA、DHPJA、TFEJA三种诱导剂对人参悬浮细胞生长和Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rgi这6种人参皂苷单体积累的影响。通过优化诱导时机,得到第7天同是MeJA、DHPJA、TFEJA三种诱导剂的最佳诱导时机;在相同的诱导浓度下,这三种诱导剂对人参悬浮细胞生长的抑制作用呈递增趋势,相应的对人参皂苷含量的诱导作用也呈递增趋势;其中,对Rb1、Rb2、Rc、Rd(二醇型皂苷Rb)的诱导作用要优于Re、Rg1(三醇型皂苷Rg),表现为Rb/Rg值的提高,二醇型皂苷中对Rb1和Rb2含量的提高作用又优于Rc和Rd。相对MeJA而言,TFEJA和DHPJA更有利于二醇型皂苷单体的积累,可以诱导更高的Rb/Rg比值。在二醇型皂苷中,DHPJA和TFEJA比MeJA对Rc和Rd含量的诱导作用相对更高。本研究比较不同结构的诱导子对人参皂苷多样性调节的差异,为探索诱导剂结构改变影响其作用机理奠定了基础。
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