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目的：支气管哮喘是儿童最常见的慢性呼吸道疾病。腺苷A2b受体(A2bAR)在哮喘中具有促炎症反应的作用，但其如何介导哮喘急性发作仍未完全清楚。本研究拟通过建立哮喘急性期小鼠模型，使用A2bAR拮抗剂(CVT-6883)、重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（依那西普）干预，探讨A2bAR通过TNF-α介导哮喘急性发作的作用机制。
方法：⑴使用清洁级(SPF)雌性BALB/c小鼠以卵蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘急性期小鼠模型。⑵实验分组:按随机数字表法随机分为A（对照组）、B（哮喘组）、C（CVT-6883组），D（CVT-6883+依那西普组）及E（依那西普组）。于最后一次激发24小时后处死小鼠，采集标本。⑶采用细胞计数法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)里的白细胞(WBC)总数和嗜酸性粒细胞(EOS)数。⑷各组肺组织进行病理切片并分别苏木素-伊红(HE)染色和碘酸希夫(PAS)染色，观察肺组织的病理改变和黏液产生情况。⑸采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。⑹采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肺组织中A2bARmRNA的表达情况。
结果：①哮喘组小鼠肺组织HE染色表现出大量炎性细胞浸润，粘膜增厚，肺泡间隔增宽、断裂; CVT-6883组、依那西普组及CVT-6883+依那西普组较哮喘组可见上述病理改变减轻;CVT-6883组较CVT-6883+依那西普组病理改变减轻。PAS染色显示哮喘组黏液指数（2.83±0.99）较对照组(0)明显增大(P＜0.05)，上皮层杯状细胞肥大增生。CVT-6883组（0.15±0.02）、依那西普组（0.18±0.04）及CVT-6883+依那西普组（0.72±0.11）的黏液指数较哮喘组减小(P＜0.05);CVT-6883组黏液指数较CVT-6883+依那西普组减小(P＜0.05)。②哮喘组小鼠WBC总数（41.38±5.81×104/ml）及EOS数（13.93±1.44×104/ml）均明显高于正常对照组（2.40±1.28×104/ml，0.18±0.09×104/ml，P＜0.05）;CVT-6883组（11.15±3.83×104/m1，0.33±0.11×104/ml）、依那西普组（13.84±3.02×104/ml，0.41±0.09×104/ml）及CVT-6883+依那西普组(17.38±3.86×104/ml，1.04±0.23×104/ml)与哮喘组相比均明显减少（P＜0.05）;而CVT-6883+依那西普组较CVT-6883组明显增加(P＜0.05)。③与对照组相（100.4±5.68 pg/ml）比较，哮喘组（145.24±8.81 pg/ml）的TNF-α浓度明显升高(P＜0.05);CVT-6883组（130.87±5.88 pg/ml）、CVT-6883+依那西普组（115.71±8.23 pg/ml）及依那西普组（121.96±8.66 pg/ml）TNF-α浓度较哮喘组明显下降(P＜0.05），而且CVT-6883+依那西普组与CVT-6883组相比，TNF-α浓度明显降低(P＜0.05）;然而依那西普组与CVT-6883组相比差异无统计学意义(P＞0.05）。④哮喘组（8.90±1.09）与正常对照组（0.63±0.19）相比，A2bAR mRNA表达增多(P＜0.05)。CVT-6883组（1.63±0.32）和依那西普组（5.33±0.41）的A2bARmRNA表达量均较哮喘组减少(P＜0.05）。而CVT-6883+依那西普组（2.48+0.59）较CVT-6883组，A2bAR mRNA表达量相对增多(P＜0.05）。⑤肺组织的A2bAR mRNA表达与黏液指数、BALF里的TNF-α水平及WBC和EOS的关系均呈密切正相关(P＜0.05）。BALF里的TNF-α水平与WBC的关系呈密切正相关(P＜0.05)，BALF里的TNF-α水平与EOS、黏液指数的关系呈正相关(P＜0.05）。
结论：A2bAR在哮喘急性期中的作用机制是，通过诱导肺组织释放TNF-α炎症因子，引起支气管白细胞和嗜酸粒细胞的增多堆积、杯状细胞增生肥大以及黏液产生，从而引起哮喘气道炎症和高反应。