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[目的]
研究食管鳞癌患者体内Th17细胞的分布及其浸润到肿瘤组织的机制。
[方法]
依据食管癌pTNM分期(UICC,2009)将65例食管鳞癌患者分为两组:Ⅰ-Ⅱ期(n=42)为早期食管癌:Ⅲ期(n=23)为进展期食管癌。(1)采用流式细胞术检测食管癌患者癌组织、癌旁组织及外周血中CD4+IL-17+细胞占CD4+T细胞的比例,并结合患者的临床及病理资料分析食管癌患者癌组织中Th17细胞的比例与临床及病理特征的关系;(2)流式细胞术检测食管癌患者癌组织、癌旁组织及外周血中CCR2+/CCR4+/CCR6+Th17细胞占Th17细胞的比例;(3)RealtimePCR检测癌组织及癌旁组织中相应趋化因子CCL2、CCL17、CCL20、CCL22mRNA表达水平,采用直线回归分析对趋化因子mRNA水平和Th17细胞的比例进行相关性分析;(4)体外趋化实验检测重组人CCL2、CCL17、CCL20、CCL22对肿瘤组织来源Th17细胞的趋化作用。
[结果]
(1)癌组织中Th17细胞占CD4+细胞的比例(7.6%±1.3%)显著高于在癌旁组织中的比例(4.9%±1.1%)和外周血中的比例(3.8%±1.0%)(p＜0.001);结合临床资料进一步分析提示,食管癌患者癌组织中Th17细胞表达的上调与患者肿瘤的病变长度、分化程度、浸润深度无关(p＞0.05),而与肿瘤的pTNM分期及有无淋巴结转移有关(p＜0.001);
(2)在癌组织、癌旁组织及外周血中,Th17表面均表达大量CCR4(癌组织:46.2%±5.4%,癌旁组织:37.9%±5.8%,外周血:34.1%±5.6%)和CCR6(癌组织:56.3%±7.0%,癌旁组织:45.1%±6.1%,外周血:39.1%±6.9%),也有一定量CCR2表达(癌组织:23.8%±4.2%,癌旁组织:21.9%±3.40/0,外周血:22.7%±3.9%)。对三组样本中Th17表面CCRs的表达情况分别作两两比较,癌组织中Th17细胞表面CCR4+/CCR6+Th17细胞的比例高于癌旁组织及外周血(p＜0.001),且进展期食管癌患者癌组织中Th17表面CCR4的表达高于早期患者(Ⅰ-Ⅱ期43.1%±4.0%vs.Ⅲ期51.4%±2.9%,p＜0.001);
(3)癌组织中存在CCR4和CCR6的特异性配体CCL2、CCL17、CCL20和CCL22,这些趋化因子的mRNA水平均高于自身对照癌旁组织,且CCL17、CCL20、CCL22mRNA水平与Th17细胞的比例呈正相关关系(p＜0.001);
(4)重组人CCL17、CCL20、CCL22在体外对Th17有直接趋化活性,在培养液中加入CCL17、CCL20、CCL22单抗均可抑制此趋化效应。
[结论]
(1)食管鳞癌癌组织存在Th17细胞聚集现象且与TNM分期有关:
(2)Th17细胞表面表达大量CCR4、CCR6和一定量CCR2;
(3)食管癌癌组织中表达大量CCL17、CCL20和CCL22,且与Th17细胞的比例正相关;
(4)CCL17、CCL20、CCL22在体外能引起Th17细胞迁移,CCR4-CCL17/22和CCR6-CCL20趋化轴在食管鳞癌患者Th17浸润到肿瘤组织中发挥重要作用。