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在卵子发生过程中,翻译调节对调控基因表达起着关键作用。卵母细胞生长期合成和储存的mRNA将在卵子成熟后期或胚胎发育早期被激活翻译。在哺乳动物的卵母细胞中,编码组蛋白的mRNA是含量最为丰富的nRNA之一,但是具体的翻译调节机制尚不十分清楚。其中复制依赖型组蛋白mRNAs6勺3’非翻译区具有茎环结构,SLBP蛋白特异性地结合在茎环结构上,对这些mRNAs (?)勺稳定性和翻译起着重要调控作用。这类组蛋白的积累需要SLBP蛋白在卵母细胞生长期表达,并在减数分裂成熟后期大量的积累。有鉴于此,本研究以猪SLBP基因为猪卵母细胞体外成熟质量的重要候选基因来研究猪SLBP基因在卵母细胞中表达规律及基因结构。1、卵母细胞体外成熟评价猪卵母细胞体外成熟过程的地衣红染色核相分析。结果表明：从卵巢的直径3-6mm卵泡中抽取的卵母细胞以GV期为主。体外成熟培养24h后,91.5%卵母细胞发生了生发泡破裂,当体外成熟培养42h时,可以使88.5%的卵母细胞完成第一次减数分裂,停滞在第二次减数分裂中期。本实验体外培养的猪卵母细胞在0h时基本处于GV期,在24h基本发生GVBD,在42h基本发育到MII期。2. SLBP基因表达规律利用半定量RT-PCR技术检测结果表明：SLBP mRNA在0h、12h、24h、36h和42h收集的卵母细胞中mRNA的相对表达量分别为0.25、0.275、0.28、0.27和0.31,从卵母细胞GV期到MII期各个发育阶段,SLBP mRNA相对表达水平稳定,各个时间点表达量无显著差异。利用Western blot技术检测猪卵母细胞体外成熟过程中SLBP蛋白的变化：SLBP蛋白在0h的卵母细胞中就能检测到,并且在0h、24h和42h卵母细胞中相对表达量分别为0.73、0.81和1.51,呈显著上升趋势。SLBP蛋白在猪MII期卵母细胞中表达量最高,与GV期和GVBD期相比,有极显著差异(P<0.01)。通过与蛋白Maker进行比较,测得猪SLBP蛋白表观分子量为41kDa,并且在42h时,SLBP蛋白电泳迁移率发生了变化,推测SLBP蛋白发生磷酸化。3、SLBP(?)勺克隆和生物信息学分析本研究以人和牛等物种间SLBP的cDNA序列保守区为模板,设计五对引物,成功扩增出猪SLBP基因大部分cDNA序列,长度为1053bp,经过NCBI-BLAST比对和物种间编码区比对,确定为该序列覆盖了猪SLBP基因全部编码区序列,编码区全长828bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,编码275个氨基酸残基。在6种哺乳动物中,猪与牛的SLBP基因编码区序列的同源性(90.7%)最高,犬(82.73%)次之,顺次为小鼠81.64%、大鼠81.16%、人80.64%和黑猩猩80.31%。并且通过序列比对,发现在猪SLBP mRNA3’非翻译区发现一个类似于CPE结构的序列。4、研究意义：实验结果表明SLBP基因表达在卵母细胞体外成熟过程中呈阶段特异性,并且与卵母细胞成熟阶段有重要关联,卵母细胞生长期表达的转录产物调控着卵母细胞成熟和早期胚胎发育。这些母源信息负责完成减数分裂,完成成熟的卵母细胞重构到全能胚胎细胞的全过程,验证了SLBP蛋白在卵母细胞中的表达规律不同于体细胞。通过对猪SLBP基因全部编码区的克隆和测序,为卵母细胞成熟质量重要分子标识的研究提供了新思路,从而为提高卵母细胞体外成熟质量,建立高效的猪体细胞核移植体系打下基础。从宏观上说,卵母细胞成熟质量提高必将使得体细胞克隆猪在人类动物疾病模型和异种器官移植方面显示出更大的优势和应用潜力。