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血管新生是指从已存在的血管床中产生的新生血管系统。此过程是一个极为复杂的病理生理过程，受到许多正性及负性血管新生调节因子的共同调控。大量研究表明，肿瘤的发生和发展都伴有新的毛细血管生成，抗血管新生治疗可以使肿瘤进入休眠状态或停止进展。近年来研究表明，血液肿瘤性疾病和实体瘤一样，存在血管新生，并日益受到关注。 骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes，MDS)属造血系统异质性克隆增殖性疾病。在疾病演变过程中，部分MDS发展为急性白血病。MDS患者骨髓中是否也存在血管新生，已引起少数学者的关注。国外已有文献报道，MDS患者骨髓微血管数明显高于正常对照组。但对于MDS患者骨髓微血管数是否低于急性髓性白血病，研究结果并不一致。 在多种参与肿瘤血管形成的细胞因子中，血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是作用最强、特异性最高的促血管新生因子，在肿瘤的血管形成中起着重要的作用。MDS患者体内VEGF和bFGF水平是否增高?多篇国外文献报道了相互矛盾的结果，尚未得出明确的结论。 1994年，福尔克曼工作组报道，肽咪哌啶酮(Thalidomide，反应停)能抑制血管新生。有人认为，该药通过产生氢氧基等发挥抗血管新生作用，但其具体作用环节尚不完全清楚。该药已在临床用于治疗难治性、复发的多发性骨髓瘤和MDS，临床疗效尚佳。但其作用的确切机制尚不清楚，可能在一定程度上应归功于其抗血管新生作用。肽咪哌啶酮是通过抑制骨髓原始细胞增殖及其促血管新生基因表达，还是通过抑制骨髓微环境中血管内皮细胞增殖及其血浙江大学博士学位论文管新生相关基因表达，从而发挥其抗血管新生作用。目前尚未见报道。 本研究共分三部分:一、骨髓增生异常综合征患者骨髓血管新生初步研究:二、骨髓增生异常综合征促血管新生因子研究;三、抗血管新生药物作用机理的体外研究。 为探讨MDS患者骨髓是否存在血管新生，及其与患者临床特征的关系，我们采用免疫组织化学方法(兔抗人凝血因子vm相关抗原多克隆抗体，Factor姗一related Antigen，vonwillebrand Faetor，vWF)标记了38例MDS、15例急性髓细胞性白血病(AML)和15例正常人骨髓组织内血管内皮细胞。在光学显微镜下(X 400视野)计数骨髓切片全片中微血管数，计算平均值，表达为微血管数/x400视野，结果显示，肋S组骨髓微血管数(17士2支/X400视野)高于正常人对照组(7士2支/x400视野)(P<0.001)，但低于胡L组(24士4支/x400视野)(P<0.001)，其中MDS低危组与高危组骨髓微血管密度差异无统计意义(P>0.05)。MDS患者骨髓微血管数与骨髓原始细胞百分数、外周血白细胞、血小板数及血红蛋白水平等无明显相关关系(P值均>0.05)。研究结果表明，MDS患者骨髓存在明显的血管新生。提示血管新生在MDS发病机制中可能起到重要的作用。 为探讨MDS患者骨髓微血管数与促血管新生因子VEGF和bFGF基因表达水平的关系，对MDS患者骨髓单个核细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA、骨髓浆液和骨髓单个核细胞培养上清的VEGF和bFGF蛋白质含量等进行了检测和分析。 采用RT一PCR方法检测了37例MDS骨髓单个核细胞VEGF mRNA表达水平。结果显示，33例阳性(8 9.2%)，4例阴性(均为RA类型)。15例正常人中n例(7 3.3%)骨髓单个核细胞VEGF mRNA表达阳性，4例阴性。两组间骨髓单个核细胞VEGF mRNA阳性表达频率的差异无统计意义(P>0.05)。且MDS和正常对照组骨髓单个核细胞vEGF mRNA相对表达量的差异无统计意义(I .06士0.70 vs 1.10士1.07，P>0.05)，MDS高危组和正常对照组骨髓单个核细胞VEGF mRNA相对表达量，差异亦无统计意义(1.30士0.67 vs 0.92士0.69，P>0.05)。 同时，采用RT一PCR方法检测了37例MDS患者骨髓单个核细胞bFGF mRNA表达情况。结果显示，32例(8 6.5%)阳性，5例阴性〔均为RA类型);15例正常人中12例(8 0.0%)阳性，3例阴性:两组间骨髓单个核细胞bFGF mRNA阳性表达频率无明显差异(P>0.05)。进一步分析结果表明，MDS患者骨髓单个核细胞bFGF mRNA相对表达量高于正常对照组，差异具有高度统计意义(0.84士0.65 vs 0.38士0.25，P二0.006)。研究结果表明，MDS骨髓单个核细浙江大学博士学位论文胞bFGF mRNA呈过表达。提示，bFGF基因表达在MDS患者骨髓血管新生调控中可能起着重要的作用。 采用ELISA法检测了39例MDS骨髓浆液VEGF蛋白质表达水平，结果显示，姗S和AML患者骨髓浆液VEGF蛋白质表达水平分别为1 10.9士85.3 pg/ml、256.4士164.6 pg/m1，均明显高于正常对照组(44.6士32.gpg/ml)(P值分别为0.003和0.000)，且MDS组低于AML组(P=0.000);但MDS低危组(224.0士98.spg/ml)和高危组(88.4士50.gpg/ml)之间的差异无统计意义(P>0.05)。同时检测了这些MDS患者骨髓浆液bFGF蛋白质表达水平，结果显示:MDS和ALML患者骨髓浆液bFGF蛋白质表达水平分别为43.1士52.0 pg/ml、32.3士25.lpg/ml，均明显高于正常对照组(15.8士7.3pg/ml)(P值分别为0.003和0