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目的:揭示不同煎煮时间,附子毒-效-量之间的关系。
方法:本论文分为附子生品和各炮制品的总生物碱含量测定、附子生品与不同炮制品的指纹图谱研究和附子生品与不同炮制品的毒性、药效学实验三部分。
第一部分应用酸碱滴定的方法测定不同煎煮时间炮制品及附子生品中总生物碱的含量;第二部分采用肿LC-UV法对附子生品及不同煎煮时间炮制品的指纹图谱进行了研究;第三部分进行附子生品及不同煎煮时间炮制品的急性毒性试验和同一给药剂量下附子生品及不同煎煮时间炮制品的镇痛、抗炎、耐缺氧等药效学实验。
通过三部分实验数据结合起来,探讨、分析附子不同煎煮时间炮制品之间关系,以确定最佳的炮制时间和安全给药剂量。
结果:
1、附子生品和不同煎煮时间炮制品中总生物碱的含量集中在0.6%~.8%之间。用酸碱滴定测定附子中总生物碱含量这种方法可靠、准确。
2、用HPLC进行测定,色谱条件为:Kromisil ODS柱(4.6 mm×250 mm,5μmn);流动相中乙睛-40 mmoⅥ乙酸铵(氨水调pH10.0)梯度洗脱;检测波长为240 nm;流速1 ml/min;柱温30℃;进样量10μl。附子生品及不同煎煮时间炮制品的指纹图谱研究,发现共有峰6个,且谱图之间有较好的相似度;非共有峰也有,但是峰面积较小。各峰之间的分离度较好,能够准确的表现附子生品和不同煎煮时间炮制品之间的异同。通过精密度实验、稳定性实验及重复性实验发现该法稳定、准确可行。
3、附子生品及不同煎煮时间炮制品的急性毒性试验发现,生品的毒性很大,其他不同煎煮时间炮制品的毒性随煎煮时间的增加,毒性降低,煎煮105min以上各组毒性已很小,是人常用量的300倍以上,属安全范围。附子生品的LD50为4.85g/kg,煎煮15min组的LD50为29.93g/kg,煎煮30min组LD50为57.60g/kg,煎煮60min组LD50为77.96g/kg,煎煮105min组及更长时间组的给药100g/kg时无死亡,105min组有中毒现象,其余各组且小鼠精神、活动正常,此剂量相当于人用量的300倍以上。
附子药效学试验,样品组各给药剂量相等(都在安全剂量范围之内)。①醋酸扭体镇痛实验结果,附子生品组和阳性对照组药效最高,和对照组之间存在极显著差异(p<0.001),105nmin组和240min组与对照组比较,无显著性差异,15min组和对照组之间存在显著差异(p<0.01),其余各组与对照组之间也存在显著性差异(p<0.05)。结论:随煎煮时间增加,附子镇痛活性降低。②二甲苯引起小鼠耳肿胀试验结果,附子生品及各样品组与对照组比较均有抗炎活性(都存在显著性差异)。从肿胀率数值分析,阳性对照组的抗炎活性很强(p<0.001),而样品组抗炎活性最强的是60min组,和对照组之间存在极显著差异(p<0.001),其他各组除30min组((p<0.05))之外,和对照组比较都有显著性差异(p<0.001)。结论:附子生品及不同煎煮时间炮制品的抗炎活性以60min组和380min组最强,但是抗炎作用和阿司匹林还有一定的差距。③常压耐缺氧试验结果,附子生品及各样品组与对照组比较均有耐缺氧活性(都存在显著性差异),都能延长小鼠的存活时间。样品组耐缺氧活性最强的是60min组,和对照组之间存在极显著差异(p<0.001)。结论:附子生品及不同煎煮时间炮制品的均具有耐缺氧活性,可以延长小鼠的存活时间,其活性以60min组最强。
结论:1、附子通过煎煮其毒性降低,但是炮制品中总生物碱的含量变化不大。2、附子指纹图谱方法可靠,可作为附子质量标准的衡量因素之一。3、附子各样品均具有镇痛、抗炎、以及耐缺氧活性。4、初步确定附子最佳炮制时间为水煎煮60min,给药量小于50g/kg为安全剂量,且此时附子炮制品的活性最高。