母猪黄体期、卵泡期卵巢差异表达基因的筛选与分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liwenwu042
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母猪的繁殖障碍是影响母猪利用年限最重要的因素。母猪不发情、不受孕等繁殖障碍仍是困扰养猪业的一大难题。卵巢是人类和哺乳动物重要的生殖和内分泌器官,其主要功能是产生成熟的卵子和分泌雌激素,是母猪能够繁殖的先决条件。卵巢功能异常是引起母猪繁殖障碍的重要原因。研究黄体期、卵泡期基因表达可为研究母猪卵巢功能异常的分子机制提供必要的参考。本研究以黄体期(OC)、卵泡期(OF)经产长大二元杂母猪为研究对象,采用Solexa测序技术对卵巢进行高通量的转录组测序(RNA-Seq),然后通过生物信息学技术对标签测序所得结果进行系统的评定和深入的分析;通过相对定量PCR技术验证了所获得的数字基因表达谱结果,对差异表达谱中可能影响孕酮介导的卵母细胞成熟和卵母细胞减数分裂的基因和通路进行了系统的阐述和讨论。取得主要研究结果和结论如下:  1、采用RNA-Seq技术,成功构建了母猪黄体期和卵泡期卵巢的基因表达谱。两个文库共有4827个差异表达基因,这些差异基因主要参与了类固醇的生物合成、细胞周期、P53信号通路、柠檬酸循环、孕酮介导的卵母细胞成熟和卵母细胞咸数分裂等过程。  2、选择了14个差异基因进行qPCR,对RNA-Seq结果进行验证,结果表明RNA-Seq与qPCR结果的一致性高,本研究所得的RNA-Seq结果可信度很高。  3、差异表达基因的GO功能聚类和通路分析显示母猪卵巢黄体期卵泡期差异的主要分子基础在于激素合成、细胞周期、卵母细胞减数分裂等方面。  4、通过PCR成功克隆得到两个时期差异基因CPEB4 CDS序列新的剪切体,长度为2166bp,与GenBank序列相比较,新剪切体缺失了长度为24bp的第四外显子。  5、对筛选出的基因CPEB4进行组织表达谱分析:结果表明在黄体期母猪该基因在卵巢、小脑有高表达,在心、肝、脾、肺、肾、胃、垂体、大肠等组织表达较低,而在卵泡期卵巢表达最低,小脑表达较高。  
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