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背景：骨肉瘤是一种侵袭力强、血行转移发生早且肺转移发生率高的骨原发性恶性肿瘤，常好发于儿童和青少年。40%左右的病例出现远隔脏器转移(主要是肺转移)而死亡，骨肉瘤的肺转移是影响患者生存的最重要原因。目前，对骨肉瘤转移的分子机制尚不清楚。本实验室长期致力于骨肉瘤转移机制的研究，建立了两株来自同一母系但具有不同转移能力的骨肉瘤细胞株：F4细胞株和F5M2细胞株，其中F4细胞具有低增殖转移能力，F5M2细胞株具有高增殖转移能力。同时利用全基因组芯片技术对其表达谱进行分析，发现了若干差异表达的基因，淋巴样增强因子-1(lymphoidenhancer factor-1, LEF-1)就是其中的一个，提示其可能参与骨肉瘤的转移。Wnt信号途径是广泛存在于多细胞真核生物中的一条在进化上高度保守的、对控制胚胎发育和肿瘤的发生与转移有重要作用的信号传导通路。其异常表达或激活会导致多种疾病的发生。LEF-1作为淋巴增强因子/T细胞因子(LEF/TCF)家族成员之一，是Wnt信号通路重要的核内信号分子,其主要通过募集转录激活因子β-catenin到Wnt靶基因，从而介导信号通路导致疾病发生。目的：探讨LEF-1在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义；验证LEF-1在不同转移能力骨肉瘤细胞株(F4, F5M2)中的差异表达；初步研究LEF-1对骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响，为LEF-1在骨肉瘤的早期诊断﹑靶向治疗及预后预测等方面的临床应用提供理论基础。方法：1.应用免疫组织化学染色法(SP法)检测68例原发性骨肉瘤组织和26例骨软骨瘤组织中LEF-1蛋白的表达差异情况，并应用统计学方法分析其与骨肉瘤各项临床病理指标之间的相关性。2.采用Western-blot及quantitative RT-PCR的方法，对利用全基因组芯片筛选出来的在不同转移能力的骨肉瘤细胞株(F4，F5M2)中差异表达的LEF-1基因进行验证。3.用RNAi干涉技术将LEF-1siRNA转染到F5M2细胞中，使用Western-blot和quantitative RT-PCR的方法检测转染LEF-1siRNA后细胞中LEF-1的表达变化。4. MTT法检测干涉LEF-1的表达对骨肉瘤F5M2细胞增殖的影响。5. Transwell实验检测干涉LEF-1的表达对骨肉瘤F5M2细胞侵袭和迁移的影响。结果：1. LEF-1在骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中的阳性表达率分别为91.2%(62/68)和11.5(3/26)。LEF-1的阳性表达率在骨肉瘤组织中明显高于骨软骨瘤组织，差异有统计学意义(P<0.01)。LEF-1在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤的肺转移呈正相关关系。2.分别采用Western-blot和quantitative RT-PCR检测LEF-1在F4、F5M2细胞中的表达水平，结果显示LEF-1在F4、F5M2细胞中差异表达，在F5M2细胞中的表达较高。3.成功利用RNAi干涉技术将LEF-1siRNA转染到骨肉瘤细胞株F5M2中，Western-blot和quantitative RT-PCR检测转染效果，结果显示LEF-1在骨肉瘤细胞株F5M2中的表达下调。4. MTT实验结果显示，LEF-1siRNA实验组F5M2细胞的增殖能力与阴性对照组和空白对照组相比显著降低。Transwell实验结果显示，LEF-1siRNA实验组F5M2细胞的侵袭和迁移能力与阴性对照组和空白对照组相比显著降低。结论：1. LEF-1在骨肉瘤组织中高表达，LEF-1的表达与肿瘤的恶性程度﹑肺转移等密切相关，为骨肉瘤的早期临床诊断和预后预测提供依据。2. LEF-1在不同转移能力骨肉瘤细胞株F4、F5M2中差异表达，其在F5M2细胞中的表达高于F4细胞，提示其可能与骨肉瘤转移存在正相关的关系。3.下调骨肉瘤细胞F5M2中LEF-1的表达可显著抑制F5M2细胞的侵袭、迁移以及增殖能力。