基于量子点标记的人血清蛋白质的电泳检测方法研究

• 作 者: 刘萍萍
• 机 构: 北京师范大学
• 出 处: 北京师范大学
• 发表日期: 2011年期
• 关键词: 聚丙烯酰胺凝胶电泳 铁蛋白含量 血清检测 量子点标记 MS-MS质谱

本文主要研究基于量子点标记的人血清蛋白质的检测,分别对电泳后人血清全蛋白及单一蛋白质进行了检测。　　本论文分为两个部分,第一部分为基于CdSe/ZnS量子点标记的利用生物素和链霉亲和素特异性结合的western blotting方法对血清中的铁蛋白含量的检测。并对转膜时间,抗体浓度等实验条件进行了优化,获得了铁蛋白检测的最佳效果。发现本实验方法灵敏度高,可以实现对血清中铁蛋白的检测。和传统的DAB显色二抗上标记的辣根过氧化物酶的western blotting检测法的灵敏度和检测限进行了比较,得到此方法的检测限为0.27 ng,线性范围为0.27-0.11 ng,灵敏度比传统的DAB显色法提高了20倍。测量了实际样品中铁蛋白的含量,计算了标准偏差,计算了在实际血清样品中的回收率为98.15％-119.67％。分别考察了和血清铁蛋白含量有关疾病,如肝癌病人、地中海贫血病人血清经一维电泳,二维电泳分离后和正常人血清中铁蛋白含量的差别,为将此方法应用于临床分析提供依据。　　第二部分中,我们合成了一种氨基修饰的Si量子点并将其应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后的血清蛋白质的检测。合成出的Si量子点的直径范围为0.5-2.0 nm,且分布均匀。优化了标记缓冲液的条件,如pH值、缓冲溶液的种类和浓度等,得到了电泳后血清蛋白质检测的最佳效果。我们分别将这种方法应用于一维和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳后人血清蛋白质的检测,相比于传统的考马斯亮蓝染色法,这种方法可以检测到一些前者不能检测出的蛋白质。通过MS-MS质谱技术,对这些蛋白质进行了鉴别,为同型α1-抗胰蛋白酶,C3补体和血红素结合蛋白。研究了Si量子点和蛋白质之间的作用模式,并使用等温滴定微量热方法对Si量子点和蛋白质之间的作用进行了研究,通过实验数据,得到了其作用模式为氢键作用,并讨论了作用机理。研究表明,该方法能直接应用于电泳后血清蛋白质的检测,为血清蛋白质的检测提供了新的途径。