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本文使用胰蛋白酶水解牦牛及奶牛酪蛋白制备得到两种CPPs制品。优化了以牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白为原料酶法制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)的工艺条件,对比研究了水解底物浓度、底物浓度与酶浓度比值、水解时间等因素对制品N/P比及产率的影响。采用MFHX软件进行实验设计,同时对N/P比及产率两个指标进行了优化,得到两组不同的优化数据。采用D296大孔强碱性阴离子交换树脂对牦牛及奶牛CPPs的粗制品进行了纯化,对比研究了纯化效果。采用HPSEC分析了纯化制品的分子量分布特征,并在体外消化模拟实验体系中研究各制品的促钙吸收能力,探讨了CPPs制品的促钙吸收能力与r(N/P)、分子量大小分布之间的关系。
牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白的产率最优化条件以及氮磷比r(N/P)最优化的酶解工艺条件均基本一致,产率最大的胰蛋白酶酶解工艺条件为:底物浓度12.6%,酶解反应时间104 min,酶底物浓度比0.9%,此时产率约30%;最优的酶解工艺条件为:底物浓度8.2%,酶解反应时间155 min,酶底物浓度比1.2%,此时r约为9.92。
利用阴离子交换树脂处理可以有效地降低CPPs粗制品的r(N/P)、提高制品的质量,从离子交换的纯化过程与结果分析,牦牛CPPs与奶牛CPPs在阴离子交换纯化特性上无明显差异。经过阴离子交换树脂纯化,较之牦牛及奶牛CPPs粗制品,所获得的精制CPPs其r(N/P)均明显降低,对于CPPs的产率最优样品其r(N/P)由原来的12.2~12.4降低到6.3~6.9;对于r(N/P)最优样品,其r(N/P)由原来的9.90~9.95进一步降低至.5.6~5.8。牦牛或奶牛酪蛋白CPPs的阴离子交换精制品中的高磷组分具有相似的高效分子排阻层析(HPSEC)谱图,均分离出3个峰,分子量依次在15,000~16,500.Da之间、4,000~5,000u之间及2,500 Da左右。
牦牛与奶牛CPPs在促钙吸收能力方面无明显差异。牦牛与奶牛CPPs的r(N/P)值越小其促钙吸收能力越强,而且分子量小于5,000 Da组分在CPPs制品中所占百分率增加,则其r(N/P)呈下降趋势。在体外模拟消化实验中,未纯化的CPPs样品一般能够使钙吸收率提高20%~30%,而经过离子交换纯化获得的高磷CPPs组分则能够使钙吸收率提高50%以上。