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前言:胰腺癌是临床上常见的一种恶性程度很高的肿瘤,约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。在美国每年大约有3,3000人被诊断为胰腺癌,在欧美及我国胰腺癌的死亡率较高。胰腺癌的发生、发展、增殖、凋亡、侵袭的过程与诸多癌基因的激活和抑癌基因的失活以及与某些生长因子的调控有关。有研究表明活化转录因子家族(activating transcription factor,ATF)可与激活成磷酸化的ATF-2形成同二聚体或异二聚体,结合特定DNA序列,调控特定的靶基因表达。ATF-2在部分肿瘤发生过程中如黑色素瘤、鼻咽癌、乳腺癌、神经母细胞瘤、前列腺肿瘤、肝癌等的作用有所报道,与部分信号通路如p38/JNK、PKCε、ATM和某些肿瘤相关因子如bcl-2、细胞周期蛋白D1、MMP-2、PDGFRa、选择素E等相关。ATF-2在研究中显示了对肿瘤的相反作用,在一些肿瘤中ATF-2表现出致癌性,但在另一些肿瘤中,ATF-2则表现为抑癌的特性。有研究表明ATF-2在肿瘤的发生、发展过程中显示致癌性还是抑癌性与其在细胞中的亚定位相关,ATF-2在细胞核内显示出致癌的特性,而在胞浆中显示出抑癌的特性。虽然已经存在一些ATF-2与部分肿瘤之间关系的报道,但是目前ATF2与胰腺癌之间关系的研究是较少。吉西他滨是FDA治疗胰腺癌的一线推荐用化疗药物,经证实吉西他滨可以抑制胰腺癌细胞侵袭、增殖能力。Epithelial-to-mesenchymal transition(EMT)是上皮细胞呈现间质细胞的形态。越来越多的研究提示EMT与大多数肿瘤的发生、发展、侵袭能力密切相关。上皮细胞形成EMT主要标志有:上皮标志物E-cadherin表达的降低以及间质标志物Vimentin、Snail及N-cadherin表达的升高。在典型的EMT的模型中,细胞与细胞之间失去极性,呈现出典型的形态学改变。形成EMT的细胞表现出更强侵袭能力。目的:检测切除人胰腺癌和癌旁组织标本中ATF-2的表达差异。检测不同种类人胰腺癌细胞系的ATF-2的表达水平差异。选取表达ATF-2水平最高的人胰腺癌细胞系,在此细胞系基础上构建不同表达ATF-2水平的细胞,观察表达不同水平ATF-2的同一人胰腺癌细胞系对吉西他滨耐药性的差异;观察表达不同水平ATF-2的同一人胰腺癌细胞系加入吉西他滨后侵袭能力的相关指标的变化。构建经典的人胰腺癌细胞EMT模型,在此基础上研究表达不同水平ATF-2的人胰腺癌细胞系在EMT条件下侵袭能力的变化。方法:预实验中,我们实验选择2010年1月至2012年12月在中国医科大学附属第一医院手术切除胰腺癌标本42例。用Western blot和qRT-PCR实验检测切除人胰腺癌标本中癌和癌旁组织中p-ATF-2的蛋白和mRNA表达水平及其差异。经Western blot和qRT-PCR检测证实人胰腺癌和癌旁组织中ATF-2的蛋白和mRNA表达水平确实存在差异,再培养4种人胰腺癌细胞系(Panc-1/BxPC-3/sw 1990/capan2),用Western blot实验检测4种人胰腺癌细胞系(Panc-1/BxPC-3/sw 1990/capan 2)中p-ATF2的蛋白表达水平差异。在检测不同表达ATF-2水平的人胰腺癌细胞BxPC-3对吉西他滨耐药性差异的研究试验中,我们选取4组人胰腺癌细胞(Panc-1/BxPC-3/sw 1990/capan 2)中ATF-2的蛋白表达水平最高的BxPC-3细胞系,MTT法测得BxPC-3细胞对于吉西他滨的IC50值浓度。我们将siRNA-ATF-2转染入BxPC-3细胞构建低表达ATF-2的BxPC-3细胞。再分别向正常表达ATF-2的BxPC-3细胞和低表达ATF-2的BxPC-3细胞中同时加入测得对应的IC50值浓度的吉西他滨(10ug/ml),倒置显微镜下分别观察正常表达ATF-2的BxPC-3细胞和低表达ATF-2的BxPC-3细胞形态学的动态变化。如上细胞均经Western blot、RT-PCR检测ATF-2、Vimentin、E-cadherin的蛋白和RNA变化。验证不同表达ATF-2水平的人胰腺癌细胞EMT中侵袭能力差异的试验中,我们选取经典的人胰腺癌细胞Panc-1,向通过转染PGEX-HA-ATF2质粒构建高表达细胞Panc-1和正常表达ATF-2的Panc-1细胞中加入TGF-β1构建经典人胰腺癌细胞Panc-1的EMT模型。在RT-PCR实验和Western blot实验来检测在EMT条件下正常表达ATF-2的人胰腺癌细胞Panc-1和高表达ATF-2的Panc-1细胞的p-ATF-2、Snail、Vimentin和E-cadherin的表达水平。Transwell小室侵袭实验检测EMT条件下高表达ATF-2的人胰腺癌细胞Panc-1和正常表达ATF-2的人胰腺癌细胞Panc-1之间的侵袭能力差异。结果:我们证明了在人胰腺癌组织中ATF-2的表达高于癌旁组织,在4株人胰腺癌细胞系中BxPC-3细胞的ATF-2表达水平最高;吉西他滨可以对正常表达ATF-2的人胰腺癌细胞BxPC3产生一定的抑制作用,而经转染siRNA-ATF-2的人胰腺癌细胞BxPC-3对吉西他滨表现得更加敏感,侵袭力减弱更加明显。高表达ATF-2的人胰腺癌细胞Panc-1比正常表达ATF-2的人胰腺癌细胞Panc-1细胞在EMT条件下侵袭能力增强,Snail、Vimentin的表达水平更高,E-cadherin表达水平更低。结论:ATF-2被证明了在人胰腺癌标本组织中的表达水平比癌旁组织更高。在人胰腺癌细胞系中低表达ATF-2的BxPC-3细胞对吉西他滨耐药性和侵袭力明显降低。高表达ATF-2的人胰腺癌细胞Panc-1在EMT条件下侵袭能力更强。这为我们下一步在临床胰腺癌的治疗中寻找相关肿瘤标志物提供帮助。