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目的：超氧化物歧化酶是一类清除自由基的蛋白酶,对需氧生物的生存起着重要的作用,是生物体防御氧自由基毒性的关键分子。研究表明SOD具有抗衰老,免疫调节,抗辐射以及护肤美容等功效,它既可作为药用酶,亦可以作为化妆品,食品添加剂。但是因其分子量大,不能跨膜进入细胞,或透过致密的皮肤角质层,口服或皮肤涂抹吸收的效率有待提高。而细胞膜穿透肽(CPP)可以作为一个新型载体携带SOD进入细胞浆或胞核内,提高SOD的吸收和抗氧化效率。本课题运用了本人所在研究小组自主开发的人源性细胞膜穿透肽(hPP10)携带人源性Cu·Zn-SOD跨膜进入培养细胞,并观察了其抗氧化效率。 方法：(1)克隆构建重组质粒pET15b-SOD,pET15b-hPP10-SOD；(2)获得原核表达纯化的蛋白SOD及融合蛋白hPP10-SOD,Western blot鉴定正确性；(3)免疫荧光鉴定hPP10-SOD的穿膜效应,Western blot鉴定穿膜效应及时间梯度和浓度梯度效应(4)SOD酶活检测试剂盒检测hPP10-SOD穿膜后的SOD酶活性检测(5)MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。 结果：(1)成功构建重组质粒pET15b-SOD,pET15b-hPP10-SOD；(2)获得纯化蛋白SOD及融合蛋白hPP10-SOD,通过Western blot鉴定条带都是正确的；(3)免疫荧光试验结果表明5μM浓度的hPP10-SOD转导Hela细胞具有明显的穿膜效应, Western blot实验验结果表明hPP10-SOD转导Hela,Caski细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-SOD浓度可持续24h；(4)10μM的hPP10-SOD转导细胞具有很好的抗氧化活性(p<0.05)；(5)40μM浓度的hPP10-SOD对于细胞活力的影响甚小。 结论：hPP10作为新型的人原性细胞膜穿透肽具有很好的穿膜效率；通过免疫荧光,westeren blot鉴定,SOD活性检测分析验证了融合蛋白hPP10-SOD具有明显的穿膜效应和抗氧化功效,且对细胞毒副作用很小。为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-SOD应用于护肤品提供了理论依据。