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血管平滑肌细胞异常增殖是高血压、动脉粥样硬化、支架后再狭窄、大动脉炎等相关疾病的一个重要因素。抑制其异常增殖是治疗和防治这些疾病好方法。烟酸占替诺是血管扩张剂,直接作用于小动脉平滑肌和毛细血管,使血管扩张,改善血液流变学,减少周围血管阻力。是治疗缺血性脑血管病、冠心病、高脂血症和高纤维蛋白原症的常用药;脉炎消口服液是哈尔滨医科大学第二附属医院药学部正在研制的,由丹参、白花蛇舌草、黄芩、双花、刺五加等六味中药组成的纯中药制剂,其主要功效为清热解毒、活血化淤。用于多发性大动脉炎,研究证明该药具有扩张血管、改善血液循环、降低纤维蛋白及抗炎、调节免疫等药理作用,且为安全有效的中药复方制剂。通过本研究考察体外单独应用上述两种药物对血管平滑肌细胞异常增殖的抑制作用及作用机理。
目的:分别考察脉炎消口服液和烟酸占替诺对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞(Human umbilical artery smooth muscle cells,HUASMCs)增殖的抑制作用及其作用机制。
方法:(1)采用组织块贴壁法原代培养HUASMCs,并传2-3代,采用免疫组织化学染色法鉴定。(2)通过MTT比色法,检测不同浓度脉炎消(0;2μg/μL;20μg/μL;200μg/μL)、及不同浓度烟酸占替诺(0;2.76μM;27.6μM;276μM)对HUASMCs增殖的抑制作用。(3)通过RT-PCR方法,检测不同浓度脉炎消(0;2μg/μL;20μg/μL;200μg/μL)对HUASMCs内白介素-6(IL-6)mRNA表达的影响,以及不同浓度烟酸占替诺(0;2.76μM;27.6μM;276μM)对HUASMCs细胞膜上血小板衍生生长因子B受体(PDGFR-8)mRNA表达的影响。(4)Western-blotting法从蛋白水平检测,不同浓度烟酸占替诺(0:2.76μM;27.6μM;276μM)对HUASMCs膜上血小板衍性生长因子B受体(PDGFR-B)蛋白的抑制程度。
结果:(1)组织块贴壁法原代培养HUASMCs,传3代后,阳性细胞率为90%。(2)三种浓度的脉炎消和三种浓度的烟酸占替诺对HUASMCs增殖均有抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05)。(3)三种浓度的脉炎消口服液均对HUASMCs IL-6基因的mRNA表达有抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05)。三种浓度的烟酸占替诺对HUASMCs PDGFR-B基因的mRNA表达均有抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05)。(4)三种浓度的烟酸占替诺均对HUASMCs PDGFR-B蛋白表达有抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05)。
结论:(1)脉炎消口服液和烟酸占替诺对HUASMCs的体外增殖均有抑制作用。(2)脉炎消能够抑制HUASMCs IL-6基因mRNA表达,并随着剂量的增加抑制作用增强。(3)烟酸占替诺能够抑制HUASMCs PDGFR-B的mRNA和蛋白的表达,并随着剂量的增加抑制作用增强。