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T7RNA聚合酶基因和T7启动子是来源于T7噬菌体的两个表达元件,前者的表达产物可特异而高效地作用于后者,基于这种作用建立起来的表达系统在大肠杆菌中极为有效,在哺乳动物细胞中也有所应用.该文试图将该系统应用于植物.首先是T7RNA聚合酶基因的修饰与克隆.参考基因的核苷酸序列,在5端引物中融合进来自SV40大T抗原基因的核定位信号(NLS)编码序列.以大肠杆菌BL21(DE3)染色体DNA为模板,通过长片段PCR方法扩增得到经修饰的T7RNA聚合酶基因.再通过DNA重组得到修饰基因的植物表达载体间载体pET-8C上,使带有AMV非转译增强序列的GUS基因居于其调控之下,得到带有T7启动子-AMV-GUS基因-Tnos-T7终止子结构的植物表达载体对使用不同根农杆菌组合转化获得的转基因烟草进行GUS活性分析发现:同时使用pBBT7和pBIG转化获得的双抗(抗Basta和卡那霉素)转基因烟草表现出了GUS活性;而分别单独使用上述两个结构转化获得的转基因烟草及对照均未检测出GUS活性.实验结果表明:1.T7RNA聚合酶在植物细胞内获得了表达,并在NIS的作用下定位到了细胞核内;2.在植物细胞内,T7RNA聚合酶可以有效识别T7启动子,催化下游目的基因的转录.根据上述结果和推论,研究人员认为:基于T7RNA聚合酶和T7启动子建立起来的偶联表达系统在植物细胞内是有效的.