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本文采用双向电泳和质谱技术研究了春石斛(Dendrobium．Pink BEAUTYQueenX Dendrobium．Pink GEMELEGANCE)低温处理[23±1℃/10±1℃12h/12h(白天/晚上)]过程中蛋白质差异表达的变化。
①建立春石斛叶片蛋白双向电泳体系。对样品制备，蛋白溶解方法等进行了优化：采用改良TCA/丙酮法提取，含硫脲的水化液1:15复溶；采用改良的考马斯亮蓝染色，获得了可识别约1000个蛋白质斑点的双向电泳图谱，且重复性好、分辨率高。
②研究了春石斛叶片在低温诱导过程中蛋白质差异表达的变化，结果表明：低温处理10d蛋白质差异表达最为显著；低温处理后差异表达的蛋白质点35个，其中经低温处理后上调表达的13个，低温处理后下调表达的11个，低温处理10d上调表达低温处理20d下调表达的11个。对27个差异蛋白质分别进行MALDI-TOF/TOF-MS或ESI-MS/MS串联质谱分析，共获得27个较好的二级质谱图，通过数据库搜索，其中有18个蛋白质得到了鉴定。这些蛋白质主要与物质和能量代谢、蛋白质生物合成及低温响应等生物学功能相关。春石斛低温处理后大量光合作用相关蛋白表达下调，如光系统I亚基d1、细胞色素f等；果糖激酶的下调表达可能参与C/N比的提高；亚精胺合酶和线粒体F1-ATP酶表达上调，可能参与合成更多的亚精胺及ATP，差异表达蛋白可能在低温诱导春石斛开花过程中发挥作用。
本研究为进一步阐明春石斛春化过程中复杂的调控机制提供新的依据，也将为进一步研究春石斛春化作用机制奠定了初步基础。