论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(hepatitis B Virus,HBV)属嗜肝DNA病毒科，是引起病毒性肝炎的主要病原体之一。由HBV所引起的乙型肝炎是一种流行久远、传播广泛、危害严重的传染性疾病。全球慢性HBV感染者超过3亿5千万人。我国是乙型肝炎的高流行区，近10％的人口为HBV携带者，占全球总携带率的40％。患慢性乙型肝炎的病人约为3000万人，占所有现患慢性肝炎病人的80％以上。慢性HBV感染导致的肝炎肝硬化和肝癌等终末期肝病，已成为严重危害我国人民生命健康的主要疾病。因此，预防和控制HBV的感染，加强HBV相关性慢性肝病的治疗，己成为我国卫生防病工作的重要内容。 目前在我国广泛应用的抗HBV的药物主要有两类，一是α-干扰素。α-干扰素是公认有效的治疗慢性HBV感染药物。但干扰素治疗费用较贵，且使用不便，毒副作用较多，能够接受干扰素治疗的各种慢性HBV感染者的数量还比较有限。另一种有效的抗HBV药物为核苷类药物，当前在国内应用的主要是拉米夫定和泛昔洛韦。拉米夫定是近年新发现的口服抗HBV药物，具有强大的抑制HBV复制的作用，适用于体内HBV复制活跃 第口旱巨大学贝士学位论文 且滴度较高的慢性乙型肝炎的治疗【’］，包括部分对干扰素禁忌或干扰素治 疗无效的病人。该药不仅服用方便，毒副作用较小，且价位较低，易为患 者接受。 但是拉米夫定也存在一些缺点，其中最主要是长期服用该药可引起编 码HBV DNA聚合酶的P基因变异，如可导致P基因C区的酪氨酸－蛋氨 酸／冬氨酸1冬氨酸（YMDD）基序发生突变［个7］。此类变异株不仅抗药 性增高，而且大量增殖后可再次加重肝损害，引起病倩反复甚至加重【卜’］。 为了进一步了解接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBV－P 基因的变异特点及规律，以提高抗HBV的治疗效果。我们选择50例服用 拉米夫定 （100m ／d）的慢性乙型肝炎病人，采集 14例服药 48周时的 HBV－DNA检测阳性病人外周血，提取HBV－DNA并用聚合酶链反应（PCR） 技术扩增后直接测序，检测其血清中HBV聚合酶YMDD变异倩况，同时用 基因芯片方法进行验证。此外，还用逆向追踪方法对上述14例HBV DNA 阳性病人服药前、服药36周时的血清标本中扩增的HBV P基因片段进行 测序及HBV－DNA定量的检测。同时对50例病人服药前、服药12周、服 药24周、服药36周及服药48周时的ALT进行检测，观察变异者及非变 异者ALT变化情况。 结果： l、服用拉米夫定治疗 48周结束时，14例 HBV．DNA检测阳性的患者 中共有5例病人外周血中的HBV P基因发生YMDD变异，其中2例为 YVDD变异，伴L528M变异；3例为WDD变异。 2、所有YMDD变异均发生于用药36周以后。变异率为10％。同时 应用基因芯片进行技术验证，检测结果与测序完全符合。 3、除了YMDD这1主要变异位点外，还发现了若干其它的变异位点， 如 1例伴有 N482E、N487K、V521L、T5325、S56lT突变；l例伴有 T466N、 一3一 第口早巨大学硕士学位铂文 N4691、Y472N、G475R、D479N、D482N突变；l例伴发Q473K突变；3 例伴发M477L突变。 4、14例 HBV－DNA阳性的病人中共有吕例在服药 48 周时发生 HBV－DNA反跳，其中5例为YMDD变异者。50例慢性乙型肝炎病人中 有5例48周时的M水平高于服药前ALT基础水平，其中4例发生了 hiD变异。 结论： l、拉米夫定可以诱导HBV P基因的YMDD变异，变异者较非变异者 临床疗效差，发生P基因区的YMDD变异是耐药的主要原因之一。 二、对发生YMDD的病人可采用联合用药的方法，一旦发生病情急性 发作，应停用拉米夫定。 3、乙型肝炎病毒突变检测基因芯片（Micro…y GenechipX具有特异 性强、灵敏性高、快速、方便等优点，可以替代繁琐的DNA序列测定和 分析，作为临床检测HBV．DNA变异的常规方法。