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研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是威胁人类健康的常见的心脑血管疾病,在东西方人群中都有较高的发病率。而脂代谢异常是AS发生的重要原因，其发病机制目前尚未完全阐明。法尼酯X受体(Farnesoid X receptor,FXR)作为一种多功能转录因子，可以调节许多靶基因的表达，它是核受体超家族成员之一；在肝、小肠、肾上腺皮质等组织细胞中高表达，同时可以参与调节胆汁酸代谢、脂代谢、糖代谢、和胆固醇等代谢。载脂蛋白M(apolipoproteinM, apoM)是新近发现的一种载脂蛋白，在肝细胞、肾上管上皮细胞高表达,主要分布于血浆高密度脂蛋白（HDL）中，参与前βHDL形成及胆固醇逆向转运而具有抗AS作用。本课题组前期研究显示：在HepG2和LO2细胞中，已证实活化FXR可明显下调apoM分子的表达，当抑制FXR活性后，apoM表达则增加。这证明了apoM极有可能是FXR作用的新靶基因，对进一步阐明FXR下调apoM分子在AS发生发展中的作用，为防治AS提供新的治疗途径。研究目的探讨FXR下调apoM表达调控的分子机制研究方法（1）经过生物信息学方法，在线分析apoM基因启动子区域，发现FXR可能的结合序列，初步确定apoM启动子区的FXR结合位点的范围。后通过染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation,ChIP）分析在细胞内FXR和apoM基因启动子区结合位点序列的相互作用。（2）构建apoM小干扰RNA（apoM-siRNA）处理HepG2和L02细胞，Real time PCR法检测在HepG2和L02细胞中apoM mRNA表达；Western blot检测转染重组质粒后HepG2和L02细胞apoM蛋白的表达；ELISA检测转染重组质粒后HepG2细胞中apoA-I蛋白的表达。研究结果（1）通过分析apoM基因启动子区上游3000bp序列，得到了FXR可能结合位点DR2，本课题组前期研究显示：扩增apoM启动子区(-1900~-1800)区域，该区域包含预测的DR2位点；经FXR激动剂CDCA处理HepG2细胞后，进行ChIP实验，结果是加入抗FXR抗体的实验组，扩增了长为177bp包含apoM启动子区-1863bp处DR2的序列(-1900~-1800)，而阴性对照组未有明显扩增。（2）apoM-siRNA重组质粒转染HepG2细胞24-48h后，与对照组相比，apoM的mRNA和蛋白表达水平均下降；FXR的拮抗剂Guggulsterone (GS)（终浓度10μM）处理细胞16-18后,结果显示GS处理组与对照组相比，apoA-I蛋白的表达明显上升，（P<0.05）；GS作用转染apoM-siRNA(+)的HepG2细胞与GS处理组相比，apoA-I蛋白的表达明显下降。结论（1）在HepG2细胞中，FXR可以和人apoM启动子区含有DR2的序列(-1900~-1800)结合，FXR有可能通过和DR2的序列(-1900~-1800)结合而具有转录调控作用。（2）成功构建了apoM-siRNA重组质粒，FXR的拮抗剂GS促进HepG2细胞中apoA-I蛋白的表达上升与apoM有关。