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糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)是导致终末期肾病的最主要原因之一,然而,现代医学对于DKD的发病机制尚不明确。目前,治疗上多采取控制血糖、血压等方法,仍不能有效控制其发生发展。而中医药治疗本病虽有一定疗效,但由于辨证分型尚无统一标准,各医家对该病的病因病机认识也不尽相同,给临床的诊治带来了很多困难。晚期糖基化终产物(advanced glycation end-products, AGEs)是由蛋白质等大分子物质的氨基酸基团与还原糖相互作用形成的不可逆化合物,它既是病理产物,又是一种致病因素,与中医的痰、湿浊、瘀等病邪关系密切。研究表明AGEs可通过氧化应激、炎症反应、血流动力学改变等损伤组织器官,而内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)协同参与了糖尿病(diabetes mellitus, DM)、肿瘤、心血管疾病、炎症和自身免疫性疾病。AGEs是否通过ERS细胞信号通路参与了DKD的致病过程的研究鲜有报道。本研究拟通过临床和实验研究两部分,分别探讨AGEs在DKD各中医辨证分型中的表达规律、ERS在诱导肾小管上皮细胞损伤时的作用,有可能为DKD的中西结合诊断及治疗提供客观依据及有效靶点。临床研究：AGEs与糖尿病肾病相关性及中医证型分析目的：1.观察血清AGEs在DKD中的表达规律；2.分析DM及DKD患者中医辨证分型特点；3.分析DM及DKD辨证分型与AGEs的关系。方法：收集2013年6月至2014年1月深圳市中医院肾病科和内分泌科门诊及住院的DM及DKD患者共60例,及体检科正常人群20例。根据尿白蛋白肌酐比(ACR)、血肌酐(SCr)分为：①糖尿病正常蛋白尿组(DM)：ACR<30mg/g,共20例,年龄55.15±12.98岁；②糖尿病肾病蛋白尿组(DKD1)：ACR为≥30mg/g, SCr<132μmol/l,20例,年龄57.31±12.07岁；③糖尿病肾病肾衰组(DKD2):SCr>132μmol/l,20例,年龄62.85±10.07岁。④健康对照组(NC)：20例,年龄57.60±12.48岁。收集临床基本资料,如性别、年龄、体重、Scr、糖化血红蛋白(HBA1C).白蛋白(ALB)、血清总蛋白(TP)甘油三脂(TG)、血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等,并进行中医辨证分型。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组人群血清AGEs水平。结果：1.一般临床资料比较：各组间的年龄比较无显著差别(P>0.05)。DM组、DKD1组和DKD2组患者间HBA1C比较无显著差别(P>0.05)。NC组、DKD2组患者AGEs、Scr比较有显著差别(P<0.05)。2.各组血清AGEs水平的比较：DKD2组(180.56±72.31ng/1)>DKD1组(113.14±52.20ng/l)>DM组(80.63±43.12ng/1)>NC组(23.52±8.46ng/1),各病患组与健康对照组比较,差别均具有显著性(P<0.05)。3.AGEs与各指标间的相关性分析：AGEs与Scr成正相关,与GFR成负相关(P<0.01)。4.本病证型中,本证以气阴两虚证居多(28例),其次为阴虚燥热证(20例)和脾肾气虚证(12例)；标证以血瘀证、湿热证为主,血瘀证显著高于湿热证(P<0.01)。5.各组患者本证证型中,血清AGEs水平：气阴两虚证(122.53±62.45ng/1)、阴虚燥热证(126.47±56.66ng/1)、脾肾气虚证(123.25±48.76ng/1),均显著高于健康对照组(23.52±8.46ng/1)(P<0.01),但各组患者问AGEs浓度差异无显著差异(P>0.05),即AGEs浓度与中医证型无明显相关性。结论：1.DM患者血清AGEs水平明显高于非DM人群,与既往研究结果相似；2.DM有肾功能受损患者的血清AGEs水平高于无肾功能受损患者；3.DKD肾功能受损程度与AGEs成正相关；4.AGEs可以作为DKD肾功能受损的早期筛查指标,并可客观评价肾功能受损程度；5.气阴两虚,阴虚燥热,瘀血阻络是DKD的最常见证候；6.DM及DKD患者血清AGEs浓度与中医证型无明显相关性,不能作为中医辨证分型的客观依据。实验研究：AGEs对人肾近端小管上皮细胞损伤的机制研究目的：探讨内质网应激在AGE-BSA诱导肾小管上皮细胞(HK-2)损伤时的作用,方法：通过不同浓度AGE-BSA (0、25、50、100、200、400mM)及不同时间点(0、12、24、36、48、72h)分别刺激体外培养的HK-2细胞株,观察HK-2细胞的形态变化,并采用Western blot法检测ERS信号通路关键蛋白GRP78的表达。结果：HK-2细胞刺激前后镜下形态未明显改变；Western blot显示,时效特征中,刺激浓度均为100mM, GRP78蛋白表达随着AGE-BSA刺激时间的延长而升高,与正常对照组比较,刺激48h、72h时有显著性差异(P<0.05)；量效特征中,刺激时间均为48h, GRP78蛋白表达随着AGE-BSA刺激浓度的升高而逐渐升高,与正常对照组比较,刺激浓度为400mM时有显著性差异(P<0.05),提示AGE-BSA刺激HK-2细胞上调GRP78蛋白呈一定的浓度依赖、时间依赖关系。也就是说,AGE-BSA诱导的HK-2细胞损伤可能与ERS的激活有关。结论：1.AGE-BSA可以诱导体外培养的肾小管上皮细胞ERS的激活；2.AGE-BSA对肾小管上皮细胞ERS的激活呈一定的时间依赖、浓度依赖。