论文部分内容阅读
背景：22q11.2区域因存在低拷贝重复序列(Low copy repeats, LCRs),易发生染色体的不等交换重排,引起基因拷贝数变异(Copy Number Variants, CNVs).以LCR22-4为界分为近端和远端CNVs,其中LCR22-4近端微缺失是目前已知的导致心脏畸形发生最常见的遗传因素之一,其在新生儿中的发病率约为1/4000。22q11.2区域CNVs引起包括心脏畸形在内的异常表型发生的根本原因是这个区域以TBX1为主的基因剂量的改变。22q11.2CNVs相关综合征表型差异性大,患儿可能仅表现出心脏畸形,也可能同时合并有其他畸形,如肺动脉发育不良、免疫缺陷、喂养困难、精神行为障碍等。因此对于合并有22q11.2区域CNVs的先天性心脏病儿,应及时发现其他畸形和染色体异常,评估手术风险。国内也有先天性心脏病患儿中22q11.2近端微缺失的研究,但样本量较小,且检测手段多用耗时费力的荧光原位杂交技术。本研究将筛查位点定位于TBXl,利用荧光实时定量PCR技术,对642名先天性心脏病患儿进行22q11.2近端CNVs的筛查,再利用Array-SNP高通量测序技术对定量PCR筛查阳性患儿进行确诊,并获得具体CNVs数据。本研究可获得这种染色体异常在各种先天性心脏病患儿中的分布频率,并探讨基因型和表型的关系；同时比较了合并有22q11.2近端CNVs的法洛四联症患儿与非综合征型(无CNVs)法洛四联症患儿术前评估指标的差异,探讨了22q11.2近端CNVs的基因型对一期根治术治疗法洛四联症术后早期疗效的影响。第一章先天性心脏病患儿中22q11.2近端CNVs分布频率的研究及表型分析目的：研究先天性心脏病患儿中22q11.2区域近端CNVs的分布频率,试图发现22q11.2近端区域不同CNVs所致表型差异,探讨基因型与表型关系。研究对象：2012年4月到2012年12月就诊于中南大学湘雅二医院心胸外科的先天性心脏病患儿。其中,男性340名,女性302名。研究方法：利用美国QIAGEN公司gDNA提取试剂盒,按照其标准程序对642例患儿进行外周静脉血gDNA提取。利用美国Applied Biosystems公司生产的ABI Stepone定量PCR仪实行SYBR(?) Green Ⅰ嵌合荧光法实时定量PCR,对642例患儿进行22q11.2近端CNVs的筛查。对筛查阳性患者利用美国illumina公司生产的Array-SNP高通量芯片(Human660W-Quad、Human Omni1-quad),进行全基因组CNVs分析,获得具体CNVs数据。结果：642例先天性心脏病患儿中,共发现了52例22q11.2近端微缺失患儿(8.1%),其中43例为LCR22-2到LCR22-4区间,大小为3Mb的缺失,9例为LCR22-2到LCR22-3a区间,大小为1.5Mb的缺失。另外也发现了5例微重复患者(0.8%),其重复片段为LCR22-2到LCR22-4区间,大小为3Mb的重复。出现22q11.2微缺失比例由高到低的先天性心脏病依次为共同动脉干(2/5,40%)、法洛四联症合并肺动脉闭锁、动脉导管未闭(3/8,37.5%)、主动脉弓中断(1/3,33.3%)、法洛四联症(16/53,30.2%)、部分性肺静脉畸形引流(1/5,20%)、肺动脉异常起源(1/5,20%)、肺动脉闭锁合并室间隔缺损(1/7,14.3%)、右室双出口(1/15,6.7%)、室间隔缺损(26/415,6.3%)。9例1.5Mb大小的微缺失的患儿为：4例(44.4%)法洛四联症,4例(44.4%)室间隔缺损,1例(11.1%)共同动脉干。5例微重复患儿中3例为TOF,1例为左心发育不良综合征,1例为主动脉弓中断。结论：1.利用定位于TBX1基因的探针,借助荧光实时定量PCR技术,可对先天性心脏病患儿进行快速灵敏的22q11.2近端CNVs的筛查。2.在先天性心脏病患儿中,22q11.2近端CNVs的发生率约为8.9%,其发生率较高的先天性心脏病依次为：共同动脉干、法洛四联症合并肺动脉瓣闭锁及动脉导管未闭、主动脉弓中断、法洛四联症。3.22q11.2近端3Mb大小微缺失的患儿心脏畸形较1.5Mb缺失患儿更加多样化。第二章222q11.2近端CNVs基因型对法洛四联症根治术早期疗效的影响目的：比较合并22q11.2近端CNVs的TOF患儿,与非综合征型(未发现CNVs)TOF患儿比较术前评估指标的差异,并评估22q11.2近端CNVs的基因型对一期根治手术治疗TOF近期疗效的影响研究对象：研究组：前期QPCR和Arrey-SNP发现的19例合并有22q11.2区域CNVs的TOF患儿,未包含TOF合并PA、PDA患儿。对照组：排除其他基因异常导致的综合征型疾病如：21、18-三体综合征、Alagille综合征导致的TOF患儿。比较术前评估指标时,根据研究组年龄和体表面积选择未发现CNVs的非综合征型TOF患儿19名；评估22q11.2近端CNVs的基因型对一期根治手术治疗TOF近期疗效的影响时,选取30例行一期根治术的无22q11.2近端CNVs的患儿。研究方法：统计研究组患儿、对照组患儿年龄(月龄)、性别、身高、体重、McGoon指数、左室舒张末期容积指数、术前四肢血样饱和度、红细胞压积、手术方式、转流时间、阻断主动脉时间、术后右室/左室收缩压比值、气管插管时间、血管活性-正性肌力药物评分、术后并发症、ICU时间、是否死亡。采用t检验或秩和检验、卡方检验比较两组各指标的差异；多元逐步回归分析22q11.2近端CNVs基因型对一期根治术后近期疗效的独立作用。结果：在研究组和对照组患儿中,左室舒张末期容积指数、经皮血氧饱和度、HCT差别无统计学意义,研究组患儿McGoon低于对照组(p<0.05)。17例合并有22q11.2近端CNVs的TOF患儿行一期根治术治疗,与对照组患儿进行比较,术中转流时间长于对照组(95.35vs85.48,p=0.04), VIS评分高于对照组(10.91vs7.38,p=0.03),气管插管时间长于对照组(82.58vs56.23,p=0.02), ICU时间长于对照组(138.47vs103.24,p=0.03)。结论：1.合并有22q11.2近端CNVs的法洛四联症患儿肺动脉发育较非综合征型(未发现CNVs)的法洛四联症患儿差。2.22q11.2近端CNVs基因型影响法洛四联症根治术后早期疗效,特别是导致ICU重症监护时间延长,VIS评分较高、机械通气时间较长。