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目的在中医“PCOS临床表现属湿热证”和西医“胰岛素抵抗是PCOS基本病理变化”理论指导下,以“黄连素清热燥湿、改善胰岛素抵抗”为切入点,分析总结黄连素治疗PCOS的作用和机理。从动物实验的角度系统检测黄连素对PCOS大鼠体重、睾酮、空腹胰岛素和血糖、性激素结合球蛋白的影响,观察黄连素减轻PCOS大鼠卵巢多囊样变程度和促排卵作用,评价黄连素是否具有治疗PCOS的作用,分析St AR在黄连素治疗PCOS大鼠过程中的变化,探讨黄连素通过何途径治疗PCOS及其作用机制。方法1、造模方法:将6周龄SPF级雌性SD大鼠48只,喂以颗粒饲料,自由饮水,适应性喂养3天。之后将48只大鼠随机分成两组:正常对照组(N=12)和造模组(N=36)。正常对照组大鼠用1%羧甲基纤维素灌胃,连续灌胃21天;造模组大鼠用来曲唑1mg/kg+1%羧甲基纤维素灌胃,连续灌胃21天,以建立来曲唑诱导的PCOS大鼠模型。2、分组及治疗方法将造模成功的大鼠随机等分为模型对照组、二甲双胍组、黄连素组,造模结束后开始灌胃给药,给药方案如下:A(空白对照组):N=12,不造模,按4ml/kg/d灌服1%羧甲基纤维素,连续3周;B(模型对照组):N=12,造模后,按4ml/kg/d灌服1%羧甲基纤维素,连续3周;C(二甲双胍组):N=12,造模后,给予二甲双胍加入4ml/kg/d的1%羧甲基纤维素中灌服。按人和动物间体表面积折算的等效剂量比值表;二甲双胍治疗PCOS常用剂量为每次口服500mg,每日3次;换算后大鼠给药量为135mg/kg/d,连续用药3周;D(黄连素组):N=12,造模后,给予黄连素加入4ml/kg/d的1%羧甲基纤维素中灌服。按人和动物间体表面积折算的等效剂量比值表;黄连素人的常用剂量为每次0.3g,每日3次;换算后大鼠黄连素给药量为81mg/kg/d,连续用药3周。3、观察指标3.1观察治疗前后各组大鼠体重、血清睾酮值的变化。3.2观察大鼠空腹胰岛素、空腹血糖及性激素结合球蛋白在治疗后各组之间的差异。3.3观察治疗后各组大鼠卵巢形态学差异。3.4通过免疫组化和PCR技术,观察治疗后各组大鼠卵巢中雄激素合成的关键因子St AR蛋白质表达及m RNA表达水平。结果1、造模结果本实验来曲唑诱导的模型大鼠出现典型的PCOS表现,符合PCOS诊断标准:阴道脱落细胞涂片失去规律动情周期,阴道上皮细胞均停留在早卵泡期阶段,提示无排卵;病理结果显示大鼠卵巢呈多囊样改变;血清睾酮升高;体重增加;空腹胰岛素升高,提示存在胰岛素抵抗。因此,本实验选用来曲唑成功地制造了PCOS大鼠模型。2、体重来曲唑诱导的PCOS大鼠体重明显升高(与空白对照组比较P<0.05),二甲双胍与黄连素均能控制PCOS大鼠体重(与模型对照组比较P<0.05),但无法使之恢复与正常大鼠体重一致(与空白对照组比较P<0.05)。3、睾酮来曲唑诱导的PCOS大鼠血清睾酮明显升高(与空白对照组比较P<0.05),二甲双胍不能降低PCOS大鼠血清睾酮值(与模型对照组比较P>0.05),黄连素可降低PCOS大鼠血清睾酮值(与模型对照组比较P<0.05),但无法使之恢复到与正常大鼠睾酮值一致(与空白对照组比较P>0.05)。来曲唑诱导的PCOS大鼠空腹胰岛素升高(与空白对照组比较P<0.05),二甲双胍和黄连素均使PCOS大鼠空腹胰岛素降至正常水平(与空白对照组比较P>0.05),二甲双胍组与黄连素组无明显差异(P>0.05)。5、空腹血糖来曲唑诱导的PCOS大鼠空腹血糖正常(与空白对照组比较P>0.05)。6、性激素结合球蛋白本实验来曲唑造模的PCOS大鼠SHBG升高(与空白对照组比较P<0.05),各组大鼠SHBG水平及游离睾酮指数与睾酮值成正相关。7、卵巢光镜下病理来曲唑诱导的PCOS大鼠卵巢增大,卵巢表面苍白,卵巢外膜增厚,卵巢内卵泡呈多囊样改变,卵泡膜细胞层增厚,卵巢内未见黄体,提示无排卵。经过治疗后,二甲双胍组仍存在上述病理表现,且与模型对照组无明显差异;黄连素组在治疗后卵巢体积缩小,卵巢外膜变薄,囊性变卵泡数量减少,未见囊性变卵泡聚集的现象,且卵巢内可见多个黄体,提示有稀发排卵。8、St AR免疫组化结果可以看出来曲唑诱导的PCOS大鼠卵泡膜细胞的细胞膜附近St AR密度明显升高(与空白对照组比较P<0.05),二甲双胍组St AR的密度与模型对照组无明显差异(P>0.05),黄连素组St AR密度小于二甲双胍组及模型对照组(P<0.05)但大于空白对照组(P<0.05)。观察发现St AR蛋白表达量与睾酮值成正相关。分析PCR结果发现:St AR在卵巢组织内的m RNA表达水平与St AR蛋白质密度成正相关。说明St AR不仅在卵巢组织内高表达,同时也是在卵巢组织内大量合成的。4、空腹胰岛素结论PCOS高雄激素血症睾酮值与卵泡膜细胞的细胞膜附近St AR密度成正相关。在相同的疗程内,二甲双胍治疗PCOS仅能改善胰岛素抵抗、降低体重,而黄连素不仅能改善胰岛素抵抗、降低体重还能降低睾酮值。黄连素能通过降低卵泡膜细胞的细胞膜附近St AR密度来降低PCOS睾酮值,提示黄连素治疗高雄激素血症不单是通过改善胰岛素抵抗来实现的,尚还存在其他途径。因此我们得出结论:黄连素可用于治疗PCOS。