植物络合素合酶基因的功能分析及其应用

来源 :中国科学院植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ninikao
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物络合素(phytochelatins,PCs)是含有γ-Glu-Cys重复结构的小分子多肽,其结构通式为:(γ-Glu-Cys)n-Gly(n=2-11)。植物络合素(PCs)由植物络合素合酶(PCS)催化谷胱甘肽(GSH)聚合而成,能够络合重金属离子而具有解毒功能,这是植物解毒重金属胁迫的重要机制之一。本文克隆了来源于重金属抗性植物绊根草(Cynodon dactylon cv Goldensun)的植物络合素合酶基因,通过基因工程手段使其在烟草中过量表达,得到了一些有望用于植物修复(phytoremediation)的工程植株。同时,在水稻(Oryzasativa)种子中利用RNAi技术抑制植物络合素合酶基因的表达,以降低重金属离子在人类最重要的粮食作物水稻的籽粒中的积累。   1.通过RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)方法从抗性植物绊根草中克隆了植物络合素合酶基因CdPCS1,其1515 bp的读码框编码一个含505个氨基酸的蛋白质,蛋白质序列分析表明它具有植物络合素合酶的结构特征,同时还具有磷酸化位点和亮氨酸拉链结构。   2.CdPCS1基因可以互补对铜和镉离子敏感的酵母突变株ABDE-1(cup1△)中缺失的金属硫蛋白基因CUP1的功能,也可以互补对砷离子敏感的酵母突变体FD236-6A(acr-3△)中的离子外排载体基因ARC3的缺失。   3.将CdPCS1转入烟草,共获得过表达CdPCS1的烟草44个株系,其中融合GFP的株系16个。对T0代的转基因植株的PCs含量以及重金属抗性和吸收能力进行了分析,其中抗性实验表明,在300μmol/L的Cd2+离子胁迫11天之后,野生型植株的叶片出现斑点状坏死,而两个转基因烟草株系S6和K49的植株没有出现受伤害症状。在100μmol/L的CdSO4处理一周后,转基因植株中的PCs含量比对照有不同程度的提高,最多提高了2.88倍。当用300μmol/LCd2+处理9天再用600μmol/LCd2+处理2天后,Cd的积累量比野生型植株增加了2倍多;用50μmol/LAs3+处理7天再用100μmol/LAs3+处理2天后,转基因植株对As的积累量最多增加了3倍多。说明转入绊根草PC合酶基因的烟草增加了植物络合素的合成,并由此增加了对镉离子的抗性以及对镉离子和砷离子的积累。   4.对转基因烟草中的CdPCS1进行了亚细胞定位研究。在激光共聚焦显微镜和荧光显微镜下分别用转基因烟草叶片组织和叶肉细胞原生质体观察融合GFP的CdPCS1,结果表明融合蛋白定位于细胞核中。   5.利用RNAi技术抑制水稻种子中植物络合素合酶基因的表达,共获得39个转基因株系。其中35个株系为种子特异性ZMM1启动子驱动OsPCS1基因的RNAi,其余4个株系由组成型的Ubiquitin启动子驱动。RT-PCR的分析结果表明:一个由ZMM1启动子驱动的RNAi转基因水稻株系的种子中,OsPCS1的mRNA水平比对照中的下降了一半。
其他文献
采用金相显微镜、扫描电镜、透射电镜和拉伸试验机等研究了预回复退火、一段中间退火和两段中间退火后箔材用3003铝合金的显微组织和力学性能.结果表明:随着退火温度的升高,3
摘要:在初中文言文教学课堂中,运用参与式教学模式,构建和谐的课堂。课前讲述历史经典故事,让课堂在开始时和谐;明确文言文课文的学习目标,让学生的学习过程与结果和谐;再现课文情境,营造和谐课堂氛围;学生做课堂的主人,积极“参与”课堂,构建和谐师生关系。  关键词:参与式;和谐课堂;学习小组  中图分类号:G633.3 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2016)02-0065  陶行知从“
多齿红山茶(Camellia polyodonta How.),俗称红花油茶,具有极高的油用价值和观赏价值。本研究在调查统计了雅安地区野生红花油茶资源整体状况后,在红花油茶分布较为集中的雅安市雨城区大兴镇、合江镇开展了优树筛选,并以复选出的15株优树为研究对象,分别对其表型性状、经济性状、油脂主要脂肪酸组成和理化性质进行了测定分析,采用灰色关联度分析法对15株优树的品质做了综合分析并排序。本研究旨
金属有机框架材料是一种新兴的多孔材料,与传统的多孔材料相比,具有比表面积高、孔隙率大、孔径可调等突出优势,可作为性能优异的吸附剂利用于工业污染治理等多个领域。BasoliteA520(简称A520)是一种新型的铝基金属有机框架材料,相比于传统的MOFs,A520具有合成条件不需有机溶剂参与、水稳定性好、吸附性能高、可以工业规模合成等优势。A520的独特优点及其优秀的性质使其具备了极高的实用化潜力,
骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs),通常也称之为骨形态发生蛋白或骨生成素,是一类广谱性的生长调节因子。已有的研究表明,BMPs的功能不仅仅局限于能诱导未分化的间
居高不下的研发、设备和生产成本成为限制塑料衬底柔性硅基薄膜太阳电池大规模推广的主要因素。本论文采用低温沉积技术,将硅基薄膜材料及太阳电池的沉积温度降低到120℃以下,
混沌系统由于对初值的敏感性,很小的初值误差就能被系统放大,因此,系统的长期性是不可预测的;又因为混沌序列具有很好的统计特性,所以它可以产生随机数列,这些特性很适合于序
本论文围绕超宽带隙半导体材料Ga2O3和BN的制备及阻变特性展开了研究工作。超宽带隙半导体材料因其大的禁带宽度,高的电子迁移率以及大的击穿场强,不仅成为制备高功率电力电子器件的理想材料,也成为制备深紫外波段光电器件的理想材料。此外,超宽带隙半导体材料具有的高击穿场强和高抗辐照特性,可以用于制备超薄结构低功耗的新型高性能耐辐照阻性存储器件。论文从材料的化学气相沉积生长原理、材料特性表征以及阻变存储器
18年生樟树人工林分生物量为111.08t/hm2,生态系统的生物量分配格局:乔木层>枯枝落叶层>灌木层>草本层。整个生态系统净生产力为12.10t/hm2·a,其中乔木层净生产力达9.55t·hm-2·
通常应用设备金属机壳来抵抗来自机壳内部的电磁场以及机壳外部其它电子产品的电磁泄露。然而,设备机壳的屏蔽效能常常受到壳体壁上孔缝的影响而减弱。但用于提供散热、可见