论文部分内容阅读
目的：通过构建放射性核素及近红外染料标记白细胞介素11类似物九环肽c(CGRRAGGSC)介导的小分子探针，获得稳定性好，标记率高，生物活性不改变的标记产品；通过对IL11受体（IL11R）高表达的肿瘤细胞及实体瘤的体内外靶向性结合实验、SPECT动态γ显像及近红外显现，探讨放射性小分子探针特异诊断IL11R表达阳性肿瘤靶向示踪机理，研究荷人高转移潜能肝细胞癌及其裸鼠骨皮下移植瘤模型显像结果，初步探讨其作用机制。 方法:(1)化学合成DTPA-c(CGRRAGGSC)及其 HPLC和MS质量分析报告；制备99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)及检测其放射性化学纯度、稳定性和生物相容性。(2)Western blot检测MHCC97H细胞和人正常肝细胞7702白介素11受体(IL-11R)表达情况；化学荧光FITC标记DTPA-c(CGRRAGGSC)实验检测探针与MHCC97H细胞的体外结合特性。(3)18只荷瘤裸鼠随机分为6组（n=3），经尾静脉注入0.74 MBq(0.1ml)分子探针99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)，不同时间测量其在荷瘤鼠体内生物分布。（4）经MHCC97H皮下移植瘤模型鼠尾静脉尾静脉注射99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)0.74 MBq(0.1ml)行SPECT显像。（5）构建近红外染料Cy-7标记DTPA-c(CGRRAGGSC)探针，分别经MHCC97H皮下移植瘤及骨移植瘤模型鼠尾静脉注射行近红外显像。 结果：(1)合成的DTPA-c(CGRRAGGSC)分子肽序为DTPA-KCGRRAGGSC-NH2，形成一对二硫键，分子量为1571.72，纯度为96.8％；制备99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)即时测定其核素标记率为98.3％，即时测定其放化纯度为(95.32±0.44)％，与人新鲜血清混合0、3h、6h和12h后，放化纯度分别为(95.11±1.76)%、(95.05±0.37)%、(92.72±0.19)%、(90.16±0.53)%，表明其与血清的生物相容性佳，体外稳定性好。(2)经Western blot检测MHCC97H细胞表达的IL-11R量是7702细胞的21倍；化学荧光结合实验表明99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)-FITC特异性结合在MHCC97H细胞的胞质和胞膜上；DTPA-c(CGRRAGGSC)能竞争抑制99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)-FITC与MHCC97H细胞结合，MHCC97H细胞上IL-11R结合分子探针具饱和性。(3)分子探针在荷瘤鼠体内迅速、持续聚集在瘤体内，4h达峰值（17.63±1.73％ID/g），其他脏器分布极少，差异有统计学意义（P<0.05）。(4)注射99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)后可见瘤体即刻浓聚；30min时可见膀胱及右侧肾脏轻度显影，随着时间推移，在膀胱逐渐浓聚；4h后随着小鼠排尿，膀胱淡影；6h时瘤体仍浓聚，全身淡影。即刻，30min和1、2、4、6h、8h T/NT比值分别为1.43±0.56、2.49±0.69、5.77±0.27、7.31±0.65、10.49±0.10、6.45±0.26、4.75±1.21。（5）近红外染料Cy-7标记核素探针后尾静脉给药,分别为注射探针后0.5h、1h、2h、4h、24h、48h及72h肝癌模型近红外动态显像，药物靶向持续聚集在移植瘤内，早期脊柱骨髓轻度显影，4h后消退，其他重要脏器未见显影。 结论：用自主合成的c(CGRRAGGSC)制备出性质优良的靶向性及稳定性，99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)是本研究中关键，为深入探讨分子探针与肝癌细胞的体内外结合特性的相关研究工作奠定了坚实的基础。肝癌MHCC97H细胞呈IL-11R高表达，受体蛋白分布在细胞膜和细胞质内，九环肽与IL-11R结合具有特异性和饱和性；99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)在体内外能与肝癌MHCC97H细胞靶向特异结合，具有特异性诊断肝癌的潜力，为临床IL-11R高表达的恶性肿瘤特异性显像和靶向治疗提供科学依据。