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本实验从江西南昌某养龟场种龟池采集了患病和濒死的11只中华草龟(编号1?11),发病龟的临床症状表现为腹甲角质层腐皮干裂,骨质层发黑,食欲不振,精神萎靡。11只病龟的概况分三种情况:4号、9号腹甲外观表现正常;1号、3号、7号龟腹甲局部干裂发黑;2号、5号、6号、8号、10号、11号腹甲大部分干裂、发黑。解剖结果表明病龟肝脏发黑,肺部发白,肠道无内容物,内脏团均伴有恶臭味。X光检测显示肺部有发炎现象。这是我国首次发现的新型龟类腹甲疾病。从11只样品龟腹甲病灶处、肝脏和肺部分离出33株菌株,经过提纯观察形态特征、血琼脂培养皿试验、革兰氏染色镜检、生理生化试验、16S r DNA序列及其系统发育分析,结果表明:经筛选得到的5株疑似致病菌(编号为GZ-1、GZ-5、F-5、F-10、PF-11)与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)有高达100%的同源性。人工回感试验选择健康的54只中华草龟,菌株PF-11通过腹腔注射(菌液浓度10~8cfu/m L)、菌液浸泡(菌液浓度10~5cfu/m L)、斜面悬挂三种方式感染健康样品龟,每一种感染方式设置试验组、平行组和对照组,每组样品龟6只。结果表明:浸泡感染方式效果最佳,试验组和平行组共11只出现阳性症状(病灶和死亡),试验组阳性率100%,平行组阳性率66.6%,对照组阳性率0%;悬挂感染方式效果较好,试验组和平行组共11只出现阳性症状,发病症状不如浸泡组明显,试验组阳性率100%,平行组阳性率66.6%,对照组阳性率0%;注射感染方式效果不理想,试验组和平行组共1只出现阳性症状,试验组阳性率0%,平行组阳性率16.6%,对照组阳性率0%。解剖回感出现阳性症状的龟,结果表明:病龟肝脏腹水、淤血发黑、肿大,有的肝表面出现白色结节,有的肺部充血肿大。在腹甲、肝脏、肺提菌做16S r DNA序列分析得到和自然发病中华草龟相同的嗜水气单胞菌,回感试验证明嗜水气单胞菌是中华草龟腹甲腐皮裂甲的病原菌。嗜水气单胞菌的药敏试验结果表明:嗜水气单胞菌对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、奈替米星、左氧氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星有强敏感性,为这种新型疾病的防治提供了科学依据。荧光定量PCR检测嗜水气单胞菌毒力基因的相对含量结果表明:传代一次后,气溶素基因表达量略有增加,溶血素基因表达量减少至一半,传代并不会影响所有毒力基因的表达量,影响大小也会有差异。在11只样品龟中选取腹甲外观正常的9号龟和腹甲出现典型病灶的1号龟做腹甲和内脏的H E染色。结果表明:9号样品龟腹甲的病理特征为松质骨层中的骨髓腔浸润大量的嗜酸性粒细胞,以出现炎症为主,无结构坏死特征;1号样品龟腹甲的病理特征为密质骨发生裂解坏死,以组织结构坏死为主,同时骨髓腔浸润大量的嗜酸性粒细胞,有组织炎症病变;肺泡隔毛细血管高度扩张出血,肺泡腔中见大量炎性细胞;脾脏组织中有大量炎性细胞;肾脏组织出现嗜酸性结节;肝脏内炎性细胞增多,含铁血黄素增多。中华草龟腐皮裂甲病的病理机制是腹甲先出现组织炎症病变,随着病情发展,腹甲组织结构裂解坏死,表观开始无明显特征到后期腹甲角质层裂开,骨质层发黑腐烂,最终死亡与裂甲后体腔开放进水有关。对中华草龟腐皮裂甲病防控的具体建议:(1)每年春季冬眠结束,用普通消毒剂(如二氧化氯等氯制剂)对养龟池塘的池水和池梗进行环境消毒,消灭病原菌,净化环境;(2)对于多年没有清塘的养龟池,针对池底淤泥的情况,适当清淤泥并用生石灰清塘;(3)一旦发病,及早诊断及时治疗。建议选用头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、奈替米星、恩诺沙星抗生素肌肉注射或口服。本实验以中华草龟(Chinemys reevesiis)为研究对象,对患腐皮裂甲病的中华草龟进行了病原学和病理学研究,确定该病的病原菌,研究总结该病的组织病理特征,扩充了宠物龟体表疾病的种类,为深入研究腐皮裂甲病的病理机制提供参考和依据。