【摘 要】
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猪链球菌是一种重要的新发人畜共患食源性病原菌,其感染人类主要通过两种途径——伤口感染和经口感染。S.suis不仅能感染猪造成猪只大量死亡,还可以通过食用被猪链球菌感染的猪肉而传染给人,人被感染后可导致永久性听力丧失或患败血症、脑膜炎、中毒样休克综合征等病症,甚至死亡。1968年,丹麦报导了第一例猪链球菌感染人的案例,此后欧洲、亚洲、美洲、澳大利亚和新西兰等多地都陆续发现了猪链球菌感染人的病例。猪链
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猪链球菌是一种重要的新发人畜共患食源性病原菌,其感染人类主要通过两种途径——伤口感染和经口感染。S.suis不仅能感染猪造成猪只大量死亡,还可以通过食用被猪链球菌感染的猪肉而传染给人,人被感染后可导致永久性听力丧失或患败血症、脑膜炎、中毒样休克综合征等病症,甚至死亡。1968年,丹麦报导了第一例猪链球菌感染人的案例,此后欧洲、亚洲、美洲、澳大利亚和新西兰等多地都陆续发现了猪链球菌感染人的病例。猪链球菌已经在全球范围内造成了严重的公共卫生问题,引起了全世界广泛关注,然而当前对猪链球菌致病机理的研究还是很有限。病原菌对宿主细胞的粘附及其随后的入侵与传播过程是病原菌感染机体的关键步骤。所以,研究病原菌的致病机制即是研究病原菌与宿主细胞的相互作用过程。分析猪链球菌的流行趋势以及对猪链球菌突破人粘膜上皮细胞途径的研究有助于对其进行防控。本研究首先通过对50株分离菌株的16S rRNA基因进行PCR扩增验证了该批菌株均为猪链球菌,然后使用多位点序列分型（MLST）技术对50株人源猪链球菌分离菌株进行了分型,该批菌株一共有5种不同的序列型（ST）,其中有29株ST1、13株ST7、4株ST242、2株ST658和2株ST665。随后,我们通过人上皮性结肠直肠腺癌细胞系Caco-2和喉表皮样癌细胞系Hep-2细胞感染模型,研究了50株分离自人的不同ST的猪链球菌分离株的粘附和入侵能力及其对两种上皮细胞的细胞毒性强弱,并对猪链球菌突破人粘膜上皮细胞的途径进行了探索,发现:（1）本研究所选取的人源猪链球菌均可以粘附、入侵Caco-2细胞和Hep-2细胞,且对Caco-2细胞和Hep-2细胞均有细胞毒性;（2）50株人源猪链球菌对Caco-2细胞的粘附能力与ST相关。ST7粘附能力最强,ST1粘附能力最弱,粘附指数平均值分别为3.37和0.75。同一种ST不同菌株间粘附能力也有显著性差异;（3）50株人源猪链球菌对Caco-2细胞的入侵能力与ST相关。ST7入侵能力最强,ST665入侵能力最弱,入侵指数平均值分别为43.67和1.06。同一种ST不同菌株间入侵能力也有显著性差异;（4）50株人源猪链球菌对Caco-2细胞的细胞毒性大小与ST相关。ST658毒性最强（平均值为67.35%）,ST242毒性最弱（平均值为12.08%）。同一种ST不同菌株间细胞毒性也有显著性差异;（5）同一菌株对Caco-2细胞和Hep-2细胞的粘附入侵能力和细胞毒性大小也有显著性差异,本研究所选取的猪链球菌中大部分猪链球菌对Hep-2细胞的粘附入侵能力和细胞毒性要高于Caco-2细胞;（6）提出了猪链球菌突破人粘膜上皮细胞的四种可能途径:先粘附然后直接入侵上皮细胞;先粘附然后释放溶血素等毒力因子破坏细胞通透性进而入侵上皮细胞;先粘附再通过旁路途径（易位）进而入侵上皮细胞;其它突破人粘膜上皮细胞的途径。另外,本研究发现毒力岛与细胞毒性相关,含有完整89K毒力岛的菌株对宿主细胞的细胞毒性显著高于含毒力岛片段小于89 kb的菌株。因此,本研究基于89K毒力岛,建立了强毒性菌株的PCR快速检测方法,有助于鉴定和区分对宿主细胞具有较强细胞毒性的猪链球菌。
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