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目的:Prkaa2、Ets-1广泛存在于各种细胞中并参与多种生理和病理过程。研究显示,Prkaa2、Ets-1均可通过多种机制参与肾脏纤维化的发生、发展等生物过程,但没有涉及二者之间可能存在的联系。因此本实验通过检测Prkaa2和Ets-1在发生上皮间质转化的肾小管上皮细胞的表达情况,探讨Prkaa2和Ets-1作为肾脏纤维化防治的新靶点的可行性。研究方法:1、HK-2、NRK-52E细胞培养对照组为HK-2、NRK-52E细胞,均购自辽宁佰昊生物科技有限公司,未经任何处理。实验组一HK-2、NRK-52E细胞均加入TGF-β1诱导纤维化;实验组二HK-2、NRK-52E细胞均转染阴性对照病毒,并加入TGF-β1诱导纤维化;实验组三HK-2、NRK-52E细胞均转染Prkaa2低表达慢病毒,同样加入TGF-β1诱导纤维化。实验组细胞均在病毒转染成功后,再加入TGF-β1诱导纤维化,培养方法同对照组。2、q RT-PCR、细胞爬片及细胞免疫荧光染色及Western blot采用以上三种方法检测对照组、实验组一、实验组二及实验组三HK-2、NRK-52E细胞中Prkaa2和Ets-1的表达情况。3、统计分析所有的实验数据均以均值±标准差来表示,应用SPSS21.0统计软件进行统计学分析,采用2-△△ct法分析目的基因m RNA相对表达量变化,观察各组细胞目的基因表达量的变化趋势。结果:1、对照组及实验组HK-2、NRK-52E细胞培养在HK-2、NRK-52E传代后4小时,细胞贴壁约80%时,进行病毒转染,体外培养72小时后荧光显微镜下观察绿色荧光,转染效率达90%以上,实验组同时加入TGF-β1诱导纤维化。24小时后观察细胞形态由圆形、多边形转变为长梭形。2、q RT-PCR、免疫荧光染色及Western blot检测各组HK-2、NRK-52E中Prkaa2和Ets-1的表达情况通过对Prkaa2和Ets-1蛋白及m RNA的定性及定量检测,发现与正常对照组同时间点相比,实验组一HK-2、NRK-52E细胞中Prkaa2和Ets-1表达上调,并且差异有统计学意义(P<0.05);与实验组二同时间点相比,实验组三HK-2、NRK-52E细胞中Prkaa2和Ets-1表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化过程中,Prkaa2和Ets-1表达量明显上调,沉默Prkaa2基因后Ets-1表达也随之下调,HK-2、NRK-52E细胞的纤维化程度有所改善,Prkaa2和Ets-1有望成为肾脏纤维化防治的新靶点。