【摘 要】
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[目的]该实验为重点研究反式高尔基体在毒素细胞内转运过程中的作用,我们设计了一个反式高尔基体的靶向信号肽基因YQRL(Tyr-Gln-Arg-Leu)连接在RTA分子的羧基端,用原核表达蛋
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[目的]该实验为重点研究反式高尔基体在毒素细胞内转运过程中的作用,我们设计了一个反式高尔基体的靶向信号肽基因YQRL(Tyr-Gln-Arg-Leu)连接在RTA分子的羧基端,用原核表达蛋白体系,纯化并测定RTA-YQRL与RTA蛋白对Hela(人宫颈癌细胞),WISH(人羊膜上皮细胞),SKOV-3(人卵巢癌细胞)三种细胞的毒性作用.[结论]该实验用基因工程方法原核表达了RTA蛋白和RTA-YQRL蛋白,利用RTA蛋白和F3GA的结合特性,温和、简单、有效地洗脱了目的蛋白.虽然原核表达的蛋白没有糖链,但是体外细胞毒性实验证明两者仍具有较高的毒性.RTA-YQRL蛋白的细胞毒性约为RTA蛋白的2~40倍,提示高尔基体可能是毒素在细胞内转运过程中的重要一环.[目的]国外已有研究报道抗体分泌和毒素内吞途径可以互相影响;RTA与产生抗RTA单克隆抗体的杂交瘤细胞一起孵育时,可与分泌途径中的抗体结合从而中和RTA的细胞毒性作用.为研究抗RTA的单克隆抗体分泌和RTA内吞两条途径的相互作用.该研究采用杂交瘤技术建立抗RTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株(ZMH9),并对其分泌的抗体进行了生物学特性研究,为下一步电镜观察RTA胞内转运过程打下基础.[结论]1.成功建立了抗RTA蛋白的单克隆杂交瘤细胞株.2.抗RTA蛋白的单克隆抗体具有良好的特异性.3.该单抗为下一步电镜观察研究RTA分子在细胞内的转运途径打下了基础.
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