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目的血吸虫病仍然是主要寄生虫疾病,全球约有2亿人感染,7.79亿人处于风险之中,有效的疫苗和理想的诊断技术的缺乏可能是导致血吸虫病难以控制的主要原因。本研究旨在利用血清蛋白质组学技术筛选日本血吸虫病诊断候选分子,并进一步评估它们在血吸虫病诊断和疗效考核中的表现以及测试它们免疫宿主后的宿主免疫应答反应。方法血吸虫成虫蛋白经过两维电泳(2-DE)后,再用血吸虫感染血清进行Western-blot分析,将Western-blot结果与同源的经考马斯亮蓝染色的2-DE凝胶比对,切取匹配的点用胰酶消化后进行质谱测序,分析质谱测序结果,从中挑选潜在可能的生物标志物进一步克隆重组,原核表达出这些蛋白的编码区全长产物。将纯化后的原核表达产物包被于聚苯乙烯微量反应板,用ELISA方法评估它们在血吸虫病诊断中的价值;同时将这些纯化抗原分别免疫BALB/c小鼠,定期收集小鼠血清,用ELISA方法检测血清中的特异性IgG及其IgG1和IgG2a抗体,分离培养小鼠脾细胞,用2μg/ml重组抗原刺激培养细胞,检测培养上清中的INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子,用Real-time PCR方法定量检测刺激后脾细胞的INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子及其T-bet和GATA-3转录因子mRNA表达水平。结果利用血清蛋白质组学方法从日本血吸虫成虫中筛选出30多个具有免疫反应性的蛋白点,其中有10阳性点能够与同源的2-DE凝胶明确匹配,质谱测序结果显示,这10个点对应4种不同的蛋白质,它们分别是亮氨酸氨基肽酶(SjLAP)、果糖二磷酸醛缩酶(SjFBPA)、26kDa谷胱甘肽转移酶(SjGST)和22.6kDa血吸虫表膜主要蛋白(Sj22.6),进一步成功表达出了重组的SjLAP(rSjLAP)和SjFBPA(rSjFBPA),纯化后的rSjLAP和rSjFBPA的蛋白浓度分别高达5mg/ml和4mg/ml;诊断评估中的ELISA结果显示,rSjLAP对急性和慢性血吸虫病的敏感性分别达到了98.1%和87.8%,rSjFBPA对急性和慢性血吸虫病的敏感性也分别达到了100%和84.7%,而两个重组抗原的诊断特异性都达到了96.7%,在治疗后不到6个月时,急慢性血吸虫病患者血清中的两种重组抗原的抗体滴度都发生有意义的下降(P<0.001),在6-12个月时,有80%患者血清中抗体恢复到正常人水平。rSjLAP和rSjFBPA抗原分别免疫BALB/c小鼠,2w后小鼠血清中的特异性IgG抗体迅速升高,至初次免疫后6w达到峰值,与特异性IgG抗体结果一致的是,两种抗原免疫后的小鼠血清中特异性IgG1也明显升高,达6w后维持在较高水平,而血清中的特异性IgG2a在免疫后8w均没有发生明显变化。与对照组相比,刺激后的脾细胞培养上清ELISA结果显示,IL-4和IL-10细胞因子明显升高,而INF-γ和IL-2没有发生变化;Real-time PCR结果显示,GATA-3、IL-4和IL-10表达水平也显著升高,而T-bet、INF-γ和IL-2则不然。结论利用血清蛋白质组学技术成功地从日本血吸虫成虫中筛选出了SjLAP和SjFBPA,并成功克隆和重组了rSjLAP和rSjFBPA;研究结果证明,rSjLAP和rSjFBPA是两个有用的血吸虫感染诊断候选分子,rSjLAP和rSjFBPA抗原分别免疫BALB/c小鼠后,宿主发生强烈的Th2型免疫优势应答。同时也证明,血清蛋白质组学方法是筛选疾病诊断候选分子的强有力手段,是切实可行的。该研究为血吸虫病诊断试剂、疫苗的开发奠定了理论基础。