粗酶和固定化酶对毒死蜱降解特性研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong471
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本研究以有机磷杀虫剂毒死蜱为研究对象,对毒死蜱的气相色谱测定方法,毒死蜱降解酶的提取,固定化酶的制备及其降解酶和固定化酶的特性进行了研究,并对降解酶在消除蔬菜表面的农药残留中的应用进行了系统的研究。主要内容如下: 1.介绍了毒死蜱的理化性质,国内外应用概况,生态毒理及生态风险特征,以及毒死蜱应用所带来的环境污染和残留问题;进而提出了作者要研究的问题。 2.建立了环境中毒死蜱的残留测定方法-气相色谱法。水样中毒死蜱的提取采用液液分配萃取法,用有机溶剂石油醚从水样中提取毒死蜱;蔬菜中毒死蜱的提取采用振荡提取法,液液分配净化等前处理方式,用气相色谱测定毒死蜱的残留量。条件为:GC-14C,FPD 检测器,内涂100%Dimethylpolysiloxane OV-101 大口径毛细管柱(30m×0.53mm i.d.);温度:进样口260℃,柱温230℃,检测器260℃;气体流量:载气50ml·min-1,尾吹30ml·min-1,氢气60ml·min-1,空气60 ml·min-1;不分流进样,进样量1μL。该方法简便、准确、分离度高,最小检知量为2.0×10-12g,在此条件下毒死蜱的保留时间为1.76min,线性范围在5.0×10-11~10-8g 之间。水样中毒死蜱添加量分别为0.01,0.1,1.0,5.0mg·L-1,回收率在98.05%-104.44%之间,变异系数小于3.14%;蔬菜样品中毒死蜱添加量为0.01、0.03、0.05、0.5、5.0 mg·kg-1,回收率在80.81%-87.68%之间,变异系数小于4.48%。缓冲液中毒死蜱的测定采用紫外分光光度法及气相色谱法。 3.从高效降解真菌镰孢霉属WZ-Ⅰ(Fusarium LK.ex Fx)中提取了降解酶,初步研究了该降解酶的分离条件及对毒死蜱的降解特性。研究表明,其胞内酶对毒死蜱的降解率高达60.8%,细胞碎片对毒死蜱的降解率为48%,但由(NH4)2SO4 沉淀提取的胞外酶液对毒死蜱的降解率仅为11.3%,经8次非诱导条件下培养后提取粗酶液,酶活力损失不显著,由此判断WZ-Ⅰ菌株的毒死蜱降解酶为胞内酶和组成酶。以牛血清白蛋白为标准蛋白测得粗提酶中可溶性蛋白的含量为3.36mg·mL-1;该酶对毒死蜱的酶促降解最适pH 为6.8,在pH 6.0~9.0 之间都有较高的活性;最适温度为40℃,在20~50℃条件下该降解酶均具有较好的降解活性,但在55℃时,酶活
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