论文部分内容阅读
雄黄是我国的一种传统中药，近年来在临床上用于治疗早幼粒细胞白血病取得良好疗效，但其确切作用机制尚不明确。我们课题组的前期工作表明，雄黄纳米微粒可以诱导白血病HL—60细胞分化、凋亡和坏死，这些过程涉及bcl—2下调、bax上调、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶以及MAPK信号通路等。在此基础上，本文重点考察了雄黄纳米微粒诱导HL—60细胞分化过程中细胞内活性氧水平、几种主要抗氧化物酶活性和非酶抗氧化剂水平的改变，旨在研究化学药物诱导白血病细胞分化过程中氧化应激的作用。主要研究方法和研究结果如下：
1.雄黄纳米微粒诱导HL—60细胞分化
采用MTT法测定雄黄纳米微粒对HL—60细胞增殖的影响，采用流式细胞术测定细胞周期的变化，采用NBT还原能力和细胞表面分化抗原CD11b的表达表征分化水平。2～10μM雄黄轻微抑制HL—60细胞的增殖，阻滞细胞周期于G0/G1期，增强细胞的NBT还原能力，并显著上调CD11b的表达。这些现象表明，雄黄纳米微粒能够诱导HL—60细胞分化，最佳分化剂量为6μM。
2.氧化应激参与雄黄纳米微粒诱导的HL—60细胞分化
雄黄与细胞作用后，采用流式细胞术测定细胞内活性氧水平和线粒体膜电位，采用紫外分光光度法测定细胞内抗氧化物酶SOD和CAT活性，采用荧光分光光度法测定细胞内主要抗氧化分子GSH及其氧化型(GSSG)的比值。在雄黄作用于HL—60细胞的前3h，细胞内活性氧水平升高、抗氧化物酶活性降低、GSH水平降低，表明细胞处于氧化应激状态。经6μM雄黄长时间(48 h和72 h)作用后，细胞内活性氧水平降低，抗氧化系统增强。雄黄诱导的线粒体膜电位降低(24h)与细胞分化程度的增加(48 h和72 h)呈线性关系，这意味着线粒体膜电位降低可能是氧化应激产生诱导分化效应的一个途径或伴随现象。