A20在IL-17诱导人牙周膜细胞促破骨分化中的作用机制初探

• 作 者: 叶宇
• 出 处: 南京医科大学
• 发表日期: 2016年01期
• 关键词: 人牙周膜细胞 IL-17 A20 RANKL

近年来随着一种CD4+T细胞新亚群-辅助性T细胞17(T helpercell 17,Th17)的发现,Th17细胞及其主要效应因子IL-17在许多免疫炎症性疾病的发生发展中发挥着重要作用,其在牙周炎免疫致病机制中的作用成为学者们关注的焦点。IL-17(又称IL-17A)是Th17分泌的最重要的细胞因子,具备能够刺激人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)表达 RANKL 的功能。通过调节人牙周膜细胞表面RANKL表达,IL-17进一步调控牙周结缔组织以及骨组织的平衡。泛素化酶 A20(TNFα 诱导蛋白[TNFAIP]-3,The tumor necrosis factor alpha-induced protein3)是一种广泛表达及可诱导的胞浆蛋白,是炎症以及免疫重要相关信号通路NF-κB(Nuclear factor-κB)的负反馈调节因子。在多种疾病模型中,A20过表达均表现出抗炎作用。研究发现A20可通过与TRAF6(Tumor-necrosis factor receptor-associated factor 6)结合负反馈调节 IL-17 信号通路,A20如何通过调控IL-17信号通路,进而影响其在牙周炎骨破坏机制中的作用,其潜在的调控机制又是什么,本实验将对这些进行探讨。目的:通过检测体外培养的hPDLCs在IL-17作用下RANKL、OPG、A20表达水平改变,并检测IL-17作用于A20siRNA基因沉默以及慢病毒过表达后的hPDLCs相应蛋白基因表达水平改变,并进一步研究A20与IL-17相关的TRAF6-NF-κB通路及MAPK通路的关系。旨在深入理解牙槽骨吸收的发生机制,进而研究A20作为牙周炎治疗靶点的潜在可能性。方法:选取因正畸治疗而拔除的前磨牙,组织块法分离培养hPDLCs,鉴定后传代培养。HPDLCs分别转染A20siRNA基因沉默及A20过表达慢病毒后,分为对照组、沉默组和过表达组,IL-17(50ng/ml)刺激各组hPDLCs一定时间后,分别检测RANKL、OPG、A20、IL-6表达水平改变,测定RANKL/OPG,并进一步检测过表达组在IL-17(50ng/ml)刺激下NF-κB、MAPK、Akt通路激活情况。结果:IL-17(50ng/ml)刺激 A20 沉默/过表达状态的 hPDLCs 0、6、12、24、48h后,与正常对照组相比较,RANKL/OPG 比值在沉默组增大,过表达组降低。A20沉默时,促炎因子IL-6分泌增加,A20过表达时,IL-6分泌减少。沉默组MAPKs(P38、ERK1/2、JNK)、.Akt、NF-κB 信号通路激活时间提前,P65 核转移增强,过表达组Akt以及IkBα磷酸化蛋白量减少,P65核转移减少。结论:本研究首次发现A20可能参与调控IL-17诱导的hPDLCs促破骨分化能力,通过抑制细胞RANKL/OPG比值,相关炎症因子表达,NF-κB信号通路及Akt等信号分子活化,进而发挥其对hPDLCs在IL-17诱导下的促破骨分化能力的抑制作用。A20与牙周炎炎症进展及骨破坏作用联系紧密,本研究进一步探讨了A20作为牙周炎疾病治疗潜在靶点的可能性。