论文部分内容阅读
目的:观察右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)对梗阻性黄疸(Obstructive jaundice,OJ)大鼠肝细胞保护作用机制是否与激活PI3K/Akt信号通路有关,并采用PI3K特异性抑制剂LY924002预处理,检测PI3K/Akt信号通路在Dex抑制梗阻性黄疸肝细胞凋亡中的作用;了解凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达水平与梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的相关性;可望为临床上梗阻性黄疸引起的肝损伤的防治及在肝保护药物方面提供新的思路。方法:1.选取健康雄性清洁级Wistar大鼠共40只,体重220-270g,7-9周龄。将大鼠随机分为4组:假手术组(S组)、梗阻性黄疸组(OJ组)、右美托咪定组(DEX组)、LY294002+右美托咪定组(L组)。OJ、DEX、L组制备大鼠梗阻性黄疸模型,S组仅游离胆总管后逐层关腹。DEX组于造模后72h腹腔注射右美托咪定100ug/kg,S组和OJ组于同一时间点注射等容量0.9%无菌生理盐水,L组在给Dex10分钟前经尾静脉缓慢泵入PI3K特异性抑制剂LY294002(10%DMSO配置10mmol/L)0.3mg/kg。2.四组大鼠于注药3小时后取肝右外叶,HE染色观察大鼠肝脏的病理变化,TUNEL法测定肝细胞凋亡指数(AI),Western Blot法检测肝组织Akt、磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平,免疫组化法检测肝组织凋亡基因Bcl-2及Bax阳性细胞计数。结果:1.大鼠的一般情况:梗阻性黄疸大鼠模型的成功建立,其标志是大鼠未死亡,结扎的胆总管上段明显扩张充满胆汁,肝脏明显充血淤积。大鼠因各种原因死亡,结扎胆总管破裂,经大体和病理观察均排除在外。如因上述原因导致大鼠数量减少,应及时补充原标准大鼠,以保证实验大鼠的实际数量。实验大鼠模型建立3天后,OJ组、DEX组及L组大鼠与S组相比一般状态差,食欲明显下降,尿液颜色深黄,耳廓、尾部等毛发覆盖较少处皮肤颜色变黄,红色巩膜变浅。2.肝脏病理学改变:与S组相比,OJ组肝小叶组织结构消失,胆色素大量淤积,肝窦充血,门静脉及小叶间静脉增生伴扩张,肝细胞坏死伴大量炎性细胞浸润;DEX组肝细胞形态较OJ组正常,肝窦充血少,炎性细胞浸润少,但门静脉及小叶静脉仍有增生;L组肝细胞形态较DEX组异常,肝窦淤血加重,炎性细胞浸润增多。3.右美托咪定(Dex)对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响:与S组相比,OJ组肝细胞TUNEL检测值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);DEX组大鼠肝细胞TUNEL检测明显低于OJ组(P<0.05);L组大鼠肝细胞TUNEL检测水平明显高于DEX组(P<0.05)。4.右美托咪定(Dex)对梗阻性黄疸大鼠肝组织Bcl-2和Bax表达的影响:与S组同时相点相比,OJ组大鼠肝组织中Bcl-2和Bax的表达明显升高(P<0.05);与OJ组同时相点相比,DEX组大鼠肝组织中Bcl-2表达上调,Bax表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与DEX组同时相点相比,L组大鼠肝组织中Bcl-2表达下调,Bax表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.右美托咪定(Dex)对梗阻性黄疸大鼠肝组织Akt、p-Akt表达水平的影响:Western blot结果表明各组肝脏组织中p-Akt均有不同程度的表达,但总Akt蛋白含量变化不大。与S组同时相点相比,OJ组大鼠肝组织中p-Akt蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05);与OJ组同时相点相比,DEX组大鼠肝组织中p-Akt显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05);与DEX组同时相点相比,L组大鼠肝组织中的表达降低(P<0.05)。结论:综上所述,右美托咪定可改善梗阻性黄疸引起的肝组织结构损伤,减少肝细胞凋亡,其可能通过激活PI3K/Akt信号通路使得p-Akt在肝组织中的表达增加,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因Bax表达,来抑制梗阻性黄疸时肝细胞的凋亡,但仍需进一步探讨右美托咪定在发挥抗细胞凋亡作用中的确切机制。