重组人阴离子型胰蛋白酶的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuan6391
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
胰2白酶(Trypsin,EC3.4.21.4)是由胰腺分泌的碱性蛋白水解酶,属于丝氨酸蛋白酶(serine proteases)家族。本论文利用基因工程的方法得到重组人阴离子型胰蛋白酶。论文对可重组人阴离子型胰蛋白酶的培养条件,激活条件,纯化,部分性质及稳定性等进行了研究。同时对其在细胞培养和酶原激活方面的应用做了初步研究。   成功构建了rc-htryp的表达载体。通过培养条件优化,使rc-htryp的表达量得到提高。正交试验的方法确定培养条件为:温度15℃,IPTG浓度为1mmol/L,Ca2+浓度10mmol/L条件下得到的胰蛋白酶活力最高。研究发现上清液在pH8.0的Tris-HCl缓冲液加入1 mmol/L的Ca2+,3 U/mL的胰蛋白酶激活,4℃条件下激活24 h后得到有活性的胰蛋白酶。   对rc-htryp性质研究发现其最适温度及pH分别为30℃与pH7.6,温度高于40℃易失活。以BAEE为底物,Km和Vmax分别为12.7μmol/L和212.76μmol/min。EDTA与PMSF对酶活力影响非常大,在低浓度就能完全抑制rc-htryp的活性。Rc-htryp在激活羧肽酶原B速率上,要优于提取的牛胰蛋白酶(Sigma)。对鼠T3细胞的消化研究,发现同样活性条件下,消化速率比提取的牛胰蛋白酶(Sigma)高。   利用有机溶剂沉淀和低温冷冻干燥的方法得到了重组人胰蛋白rc-htryp固体粉末。对冻干过程中添加保护剂的种类和浓度进行筛选,发现5%山梨醇的效果最佳,可完全保持冻干过程中rc-htryp的活力。
其他文献
随着原子钟技术的不断发展,原子钟的频率稳定性等方面的性能不断提高,但其体积与功耗始终是限制其广泛应用的瓶颈之一,而小型化、低功耗原子钟在诸如GPS导航系统、作业平台中都
公路路基路面的排水设计在公路建设占有重要地位,很大程度上决定了公路建设的质量.公路路基路面排水的设计和构建作为公路设计中的关键环节,既要保证其涉及构建方式符合建筑
单片集成的波长转换器是波分复用系统进一步发展的关键光电子器件之一。与传统的交叉相位调制(XPM)和交叉增益调制(XGM)等波长转换方案相比,分离吸收调制(SAM)集成波长转换器
对于空间应用的碲镉汞红外探测器组件,寿命试验是一种很重要的可靠性试验方法,寿命试验数据的统计分析结果可作为可靠性预测、制定筛选条件和改进质量的依据,因此开展对碲镉汞红
神经退行性疾病(NDs)是一类异质性疾病,具体描述为神经元结构或功能的进行性和选择性丧失。许多病理特征如线粒体缺陷和蛋白质堆积在阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)、帕
近年来,能源问题和环保问题日益突出,这种背景下,光伏行业得到了迅猛发展。这两年,发展过热导致行业惨淡的现状也暗示了光伏行业的无限前景。太阳能电池作为光伏的核心部件,其性能
对于空间光学遥感仪器而言,温度不但会影响到它的使用可靠性、使用寿命,同时也直接影响它的成像质量,光学遥感仪器必须在合适的温度范围内才能正常有效地工作。在静止轨道三轴稳
自旋纳米振荡器是基于磁电阻效应和自旋转移力矩效应的一种新型纳米微波器件,它具有频率可调、纳米尺度、结构简单,并且易与标准硅工艺兼容等优点,在无线通信、微波源和微波检测
卫星平台的高精度海洋水色遥感需要解决遥感器的大视场、低杂散光、低偏振灵敏度的难点,国际上采用了望远镜整体旋转扫描配合多元探测器的成像方式,取得了比较好的效果。但国内
目的:研究过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对大鼠肾脏髓袢升支粗段(TAL)管周膜10pS氯通道活性的影响及其作用机制。   方法:采用细胞贴附式(cell-attached)和内面向外式